Examen 3 partie 3 Flashcards
Quels sont les étapes pour obtenir des cellules en culture?
1) Prélèvement de fragments tissulaires
2) Incubation à 37
3) Préparation des plaques en culture : recouvertes de fibronectines et autres éléments de matrice cell
4) Ajout de solution nutritive et de sérum de veau foetal : contient facteurs de croissance essentiels pour prolifération
5) Facteurs de croissance spécifiques (EGF et insuline et transferrine)
Qu’obtien-on après la mise en culture?
- Cellules prédominantes apparaissent : fibroblastes
- Autres cellules en moins grande quantité : cellules épithéliales
Quelles sont les caractéristiques des fibroblastes?
- Même caractères cellulaires et même protéines de surfaces
- ## Peuvent se différencier en adipocytes, cellules du tissu conjonctif, cellules musculaire (cell. totipotentes)
Qu’oberve-t-on dans des cellules en croissance?
- Cellules tapissent le fond du récipient grâce à la sécrétion de protéines de la matrices extra-cellulaire
- Croissance jusqu’à confluence (inhibition de contact)
- Densité de saturation en fonction du % de sérum ajouté
Quel est l’utilité de la trypsine ou autre protéine pour obtention de cellules en culture?
Permet de détacher les cellules du fond du pétri
Permet de les manipulers ou les transferer de contenant
Quels sont les seul type de cellules qui n’ont pas besoin d’un support pour croitre?
- Cellules sanguines
- Cellules de la rate
- Cellules de la moelle osseuse
Qu’est-ce qu’une lignée cellulaire immortelle?
Groupe de cellule en culture qui se divise indéfiniment dans des conditions appropriées (pas de sénescence)
Ces cellules immortelles peuvent être utilisées en recherche à long terme
Comment est la transformation spontanée dans les cellules normales?
Elle est rare sans intervention
Comment se déroule la prolifération des cellules de souris?
- Croissance initiale
- Crise : majorité des cellules arrêtent de se diviser
- Apparition de cellules immortelles
Qu’est-ce qu’une culture primaire?
- Prélèvement direct dans un tissu
- La majorité des cellules atteignent la sénescences (mort des cellules)
- Prédominance des fibroblastes
Qu’est-ce qu’une culture secondaire?
- Dérivée d’une culture primaire mais modifiée pour avoir la capacité de proliféré en continu
- Immortelles
- ## Homogène (identiques génétiquement)
Quelles cellules humaines peuvent proliférer indéfiniment?
Les cellules tumorales seulement
Chez les rongeurs, comments est la capacité d’immortalité des cellules?
Grande capacité d’établissement de lignées cellulaires (immortelle)
PAr quoi peuvent subir une transformation maligne les cellules en culture?
- Virus
- Agents chimiques
- RAdiations
- Transfection d’oncogènes
- Rayon UV, X
Quelles sont les caractéristiques des cellules malignes en culture?
- Foyer de prolifération
- Perte de l’inhibition de contact
- Cellules plus sphériques
- Diminution de l’adhérence au fond
- Peuvent produire des tumeurs si réimplantées dans un animal
À quoi ressemble des cellules cancéreuses en culture?
- Elles s’emplilent et sont désorganisées
- Pas d’inhibition de contact
- Indépendantes des facteurs de croissance
- Indépendantes du support
- Forment des tumers chez les souris nude
De quoi les cellules transformées ont-elles moins besoin?
- En facteurs de croissance (faible concentration de sérum)
Quelles sont les propriétés des cellules transformées?
- Moins besoin de facteurs de croissance
- Peuvent sécréter des facteurs de croissances analogues (stimulation autocrine)
- Perte de la faculté d’entrer en quiescence en carence de nutriment (moins de besoin)
- Multiplication constante
Que font les cellules transformées en cas de conditions défavorables?
- Elle se multiplient constamment et s’Autodétruisent en proliférent
Comment est la prolifération des cellules transformées et qu’est-ce que cela permet?
- Indépendante de l’ancrage
- Perte de l’inhibition de contact (croissance en amas anarchiques, rarement des jonctions lacunaires)
- Cause des métastases
Quel est l’apparence des cellules transformées?
CEllules qui sont plus sphériques
Quelles sont les modifications à la surface des cellules transformées?
- Mobilité accrue des protéines de surface sans modif. de structure de membrane lipidiques ni de la mobilité latérale des lipides
- Modification des glycoprotéines et glycolipides
- Modification des liens entre les protéines superficilles et les éléments du cytosquelette
Qu’est-ce qui peut arriver aux protéines membranaires et sécrétées des cellules transformées?
Leur glycosylation
Qu’est-ce que l’effet Warburg?
- Les cellules cancéreuses obtiennent de l’énergie par dégradation non-oxydatives du glucose (glycolyse) (produit bcp de lactate)
- Alors que normales produisent par dégradation oxydative du pyruvatae
- Donc théorie que le cancer est un dysfonctionnement mitochondrial
Comment se déroule l’entrée du glucose dans les cellules transformées?
- Accélération de l’entrée
- Récepteur de glucose exprimé abondamment dans les érythrocytes et le cerveau car activité glycolytique augmentée
Qu’arrive-t-il à la fibronectine superficielle des cellules transformées?
- La fixation de la fibronectine ne se fait plus à la surface des cellules cancéreuses uniquement mais il y a quand même production
Qu’arrive-t-il avec les microfilaments d’actine daans les tumeurs?
- PErte des microfilaments
- Ils deviennent dispersés ou concentrés sous la membrane cellulaire
De quoi est responsable la perte d’éléments cytosquelettique?
REsponsable de l’augmentation de mobilité des protéines de surface (cellule plus ronde)
Qu’est-ce qui est libéré par les cellules transformées?
FActeurs de croissance transformants
TGF-alpha et bêta
Qu’est-ce qui est sécrété par les cellules transformées?
Des protéases
- Activateur de plasminogène en plasmine
Que provoque l’augmentation de la plasmine dû aux facteurs de croissance transformants des cellules cancéreuses?
- Plasmine induit perte de microfilaments d’actine, stimule la croissance, favorise la pénétration de la lame basale par les cellules
Comment est modifié la transcription de gènes dans les cellules cancéreuses?
- Expression de gènes embryonnaires normalement éteint chez l’adulte
Qu’est-ce qu’un oncogène?
- Gènes impliqués dans la transformation de cellules en culture ou dans la tumorigenèse
- Peut causer la transformation d’une cellule
- proto-oncogène muté ou exprimée en grande quantité
QUe codent les oncogènes?
Des oncoprotéines
Qu’est-ce qu’une oncoprotéine?
Formes dérégulées de protéines dont la fonction de type sauvage est de participer au contrôle positif du cycle cellulaire ou au contrôle négatif de l’apoptose
Qu’est-ce qu’un proto-oncogène?
Gènes normaux qui jouent un rôle essentiel pour la survie des cellules
Quelles sont les catégories de gènes suppresseurs de tumeurs?
- Inhibiteurs du cycle cellulaire
- Inducteurs d’apoptose
- Protéine impliquée dans la réparation de l’ADN
Quel sont les 5 types d’oncogènes impliquées dans le contrôle de la prolifération des cellules de mammifères?
1) Facteurs de croissance
2) Récepteurs des facteurs de croissane et récepteur intracellulaire
3) Transducteurs intracellulaires de ces signaux (second méssagers)
4) FActeurs de transcription nucléaires
5) Protéines régulatrices du cycle mitotique
Comment peuvent être stimulé les oncogènes?
- Par modification du promoteur
- Insertion d’un enhancer
De quel gène provient l’oncogène sis?
Gène codant une sous-unité de la PDGF-B (facteur de croissance)
Quel est le rôle de sis dans la transformation oncogénique?
- Si gène surexplimé ou muté, entraine stimulation constante des récepteurs PDGF
- Division cellulaire incontrôlée
- Les cellules qui l’exprimet produisent bcp de facteur de croissance et activent leur récepteurs de façon autocrine
Les récepteurs impliqués dans le cancer sont des récepteurs de quoi principalement?
De facteur de croissane
Quel sont les modifications des récepteurs de facteurs de prolifération et d’hormones possibles?
- Délétion de la partie extra cellulaire
- Mutation du récepteur (1 acide aminé est changé)
Que cause la modification des récepteurs?
Une activation constitutive
Donnez 2 exemples de récepteurs de facteurs de prolifération muté.
- Neu
- EGF (erbB)
Comment est modifié le récepteur d’EGF?
Le récepteur subit une délétion de la partie externe de son récepteur, ce qui cause une activation constitutive
DE quel type est le récepteur Neu (HER2)?
Récepteur transmembranaire de type tyrosine kinase
Comment est activé le récepteur HER2?
Par de ligand
Activé en formant des dimères avec d’autres récepteurs
Comment est activé le récepteur EGF?
Par ligands comme l’EFG ou le TGF-alpha -) dimérisation
Quelle est la adifférence entre les transducteurs intracellulaires et les récepteurs?
Ils n’ont pas de domaine trans-membranaire
Quels sont les types de transducteurs intracellulaires?
- Sous unités alpha de la prot. G
- Prot. kinase spécifique à la tyrosine
- Prot. kinase spécifique de la sérine et thréonine
- Protéines Ras
- Adaptateurs
Quel est le rôle des protéines G?
- Détectent la présence d’un ligand
- Fixe le GTP
- Active l’adénylate cyclase (production AMPc)
- Hydrolyse le GTP
Qu’arrive-t-il en cas de disparition de l’activité GTPase par mutation d’un protéine G?
- AMPc produite de manière constitutive
- Prolifération anarchique des cellules hypophysaires
Quelles sont les étapes de l’activation d’une protéine G?
- Liaison d’hormone au récepteur mène à un changement de confo
- Récepteur s’associe à la prot. G
- GDP est remplacé par GTP sur la prot. G
- Prot. G se colle à l’adénylate cyclase pour la synthèse de l’AMPc
- Hydrolyse du GTP entraine la dissociation
Par quelle protéine peut être régulé la quantité d’AMPc dans la cellule?
La phosphodiesterase la transforme en AMP s’il y en trop
Que permet d’activer l’AMPc de la cellule?
La PKA
Quel est le r¸ole du groupement myristyle?
Groupement ajouté aux protéines tyrosines kinases cytoplasmiques pour les encrer dans la membrane plasmique
Est-ce qu les protéines tyrosines kinases cytoplasmiques possèdent des récepteur hormonal?
Non car ce n’est pas dans leur fonction de détecter les signaux
DAns une cellules transformées, il y a augmentation de quel processus?
LA phosphorylation des résidus tyrosine par des kinases virales ou dérégulées (mène à une cascade de signalisation
Quel type d’activité effectue Ras et qu’arrive-t-il en cas de mutation?
- Activité GTPase
- Activation de manière constitutive si mutation
- Donc ras est toujours active et active la sérine/threonine kinase
Quel sont les étapes d’activation de Ras?
1) Ras est inactif , lié au GDP
2) GEF vient se lier pour facilierla dissociation du GDP pour lier un GTP
3) Ras est actif
4) GAP se lie pour stimuler hydrolyse en GDP
Que permet de faire Ras lorsqu’il est activé?
1) Fixe RAF
2) Raf se fixe a MEK et le phosphoryle
3) MEK phosphoryle ensuite MAP qui s’active et va vers le noyau pour activer des facteurs de transcription
Qu’est-ce que des protéines à motif SH?
Protéines qui forment des agréats protéiques particuliers déréglés
Qu’est-ce que le domaine SH2?
Domaine qui se lie avec les résidus phospho-Tyr
Interagit principalement avec le tyrosine kinase ou les protéines phosphorylées
Qu’est-ce que le domaine SH3?
Domaine qui interagit avec les régions riches enrpoline
Comment est activé Ras?
1) il y a dimérisation d’un récepteur lors de l’arrivé d’hormone EGF
2) GRB2 et SOS s’y lie et permettent de lier RAS
3) SOS pousse le GDP de Ras, qui devient un GTP ce qui l’active
4) SOS se détache de Ras
Qu’est-ce que des facteurs de transcription nucléaires?
PRotéines qui agissent directement sur la vitesse de transcription en se fixant à l’ADN et en modifiant la fréquence d’amorçage de la transcription
Que fait le proto-oncogène jun?
Code pour une partie du facteur de transcription AP-1
Qu’est-ce qui arrive dans le cas d’une mutation dans P53 et RB?
Dérèglement de leur expression qui mène à des tumeurs
À quelle catégorie appartiennent Rb et P53?
- Protéines réglant le cycle cellulaire
- Anti-oncogènes
Que fait le gène Mdm2?
Gène qui commande le cycle cellulaire
Comment une cellule tumorale perd les 2 exemplaires de RB?
- Par mutation multiples
- Par perte de chromosome
- Par conversion génique
Sous quelle forme est actif P53?
Sous forme de tétramère
Comment peut être inactivé P53?
- Par mutation
- Par des protéines virales (E1b et E6)
Qu’arrive-t-il si un des allèles de P53 est muté?
- Perte d’activité supressive de tumeurs ce qui mène à des altérations de l’ADN (mutation et translocation non réparée)
- Apparition de nouveaux oncogènes
Par quoi est régulé P53?
PAr le produit du gène Mdm2
Que fait Mdm2 avec P53?
Elle reconnait P53 et cause sa dégradation dans une situation où l’ADN a été réparée ou en cas de tumeur
À quelle catégorie appartient Mdm2?
Aux oncoprotéines et aussi un facteur qui contrôle le cycle cellulaire
Sous quelle forme est active l’anti-oncogène RB?
Sous forme de monomère
Qu’arrive-t-il en cas de mutation d’un allèle de Rb?
Pas de perte d’activitésuppresseur de tumeur, l’autre allèle compense (mutation récessive)
Qu’est-ce que le rétinoblastome?
Tumeur héréditaire qui touche les enfants (courte délétion du chromosome 13
Comment fonctionne PTEN?
1) Déphosphoryle le PIP3 en PIP2 ce qui réduit l’activation d’AKT inhibant la survie cellulaire et la prolifération
Sur quelle voie de signalisation agit PTEN?
PI3K/AKT
Quel type de mutation fait PTEN?
Mutation récessive
Qu’est-ce que la protéine Bcl-2?
Oncogène qui inhibe l’apoptose
FAvorise la prolifération cellulaire
Est-ce que Bcl2 est un oncogène direct?
Non, car il ne régit pas directement le cycle mais permet la survie de cellules où l’ADN est endommagé
Qu’arrive-t-il en cas d’augmentation de l’expression de Bcl-2?
Prolifération des lymphocytes B (leucémie)
- Ils deviennt résistants à l’apoptose
Expliquer le principe de transfection d’oncogène en deux étapes?
- Mutation dans la protéine G Ras mène à une transformation cellulaire mais ne cause pas tout de suite la cancérisation car pas de caractère immortel
- Mutation de myc (protéine nucléaire) ensuite peut mener à la cancérisation
Dans quoi sont impliqués les protéines PI3-K, Akt et IAPs?
DAns la survie cellulaire (surexprimés dans les cancers)
LA mutation de quel gène cause un haut risque de cancer du sein et des ovaires?
Des gènes BRCA-1 et BRCA-2
Quel est le rôle des protéines BRCA?
Réparation de l’ADN double brin suite à une mutation par radiation
LA mutation de quels gènes mène à une prédisposition au cancer du colon?
- MSH2
- MSH6
- MLH1
Quel est le rôle des protéines MSH2, MSH6 et MLH1?
Répartion de l’ADN à la suite de la réplication
LA mutation de quels gènes mène à une prédisposition aux mélanomes malins?
Gène CDKN2
Quel est le rôle de CDKN2?
p16, régulation du cycle de division cellulaire
Bloque la synthèse de l’ADN avant que la cellule se divise
LA mutation de quels gènes mène à une prédisposition au cancer du pancréas?
Gène supresseur de tumer DPC4
Combien de cancers humaines connus sont associés à des virus?
15 à 20%
