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Biologie moléculaire > Examen 2 > Flashcards

Examen 2 Flashcards

1
Q

Comment peut-on identifier un clone spécifique à notre gène d’intérêt?

A
  • Cribler la banque d’ADN génomique ou d’ADNc à l’Aide de sonde spécifique
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Q

QUel type de molécule peut reconnaitre une sonde?

A
  • ADN
  • Protéines
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Q

Quel type de blot est utilisé pour l’ADN, l’ARN et les protéines?

A

ADN : southern
ARN : Northern
Prot. : western

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4
Q

Grâce à quoi peut-on dénaturer des brins d’ADN?

A
  • Chaleur
  • OH-
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Q

Qu’est-ce que la stringence?

A

Décrit la sévérité des conditions sous lesquelles une hybridation est effectuée

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6
Q

Comment augmenter la stringence?

A
  • Baisser les concentrations en sels et augmenter la température
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7
Q

Que permet d’augmenter la stringence?

A
  • Permet de s’assurer que la sonde ne s’accroche pas n’importe où
  • Permet l’appariement de séquences très similaires uniquement
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8
Q

DE quoi sont composé les sondes d’ADN?

A

Oligonucléotides homologues à la séquence du gène recherché

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9
Q

Comment est obtenu une sonde?

A
  • Fragment d’ADN cloné du gène chez la même espèce à l’étude ou chez un autre espèce
  • ADNc cloné qui sert de gabarit pour une sonde d’ARN
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10
Q

Avec quoi est marqué une sonde?

A

32P-dCTP ou à l’aide d’un nucléotide DIG-11-dUTP

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11
Q

Qu’est-ce que le digoxigenin?

A

Nucléotide qui contient un morceau supplémentaire lui permettant de faire une reconnaissance à l’aide d’anticorps

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12
Q

QUel type de marquage de sonde peut être effectué?

A
  • Luminescence
  • Fluorescence
  • Colorimétrique
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13
Q

À quoi sert la pré-hybridation?

A
  • Permet de saturer notre membrane d’ADN exogène pour que la sode puisse uniquement se coller à l’ADNc
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14
Q

À quoi servent les agents dénaturants dans la pré-hybridation?

A
  • Formalmide, formaldéhyde
  • Permettent d’empêcher les fragments d’ADN de s’attacher ensemble
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15
Q

Qu’est-ce que la luciférase?

A

Enzyme qui permet la lumière chez les lucioles
Elle dégrade la luciférine ce qui produit de la lumière

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16
Q

Qu’est-ce que le random primed labeling?

A

Technique utilisée pour marquer des fragments d’ADN avec des molécules radioactives ou des molécules fluorescentes

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17
Q

Comment fonctionne le random primed labeling?

A
  • Les molécules d’ADN sont dénaturées
  • Des amorces composés de 6 nucléotides différents
  • La polymérase ajoute des nucléotides normaux et des dUTP marqués une fois de temps en temps
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18
Q

Que permet le random primed labeling?

A
  • Identifier des séquences d’ADN spécifiques
  • Créer des sondes d’ADN marqués
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19
Q

Quel est le principe du marquage par PCR?

A

On met les ingrédients normaux pour une PCR mais certain des nucléotides sont marqués (dUTP)
On amplifie et on obtient des molécules d’ADN marqués

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20
Q

Quel est le principe de la Nick translation?

A
  • La DNase 1 va faire des coupure dans les brins d’ADN
  • La polymérase va retirer un nucléotide pour le remplacer par un dUTP marqué
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21
Q

Quel est le principe du marquage en 3’ avec ajout d’environ 50 nucléotides?

A

La terminal-transférase ajoute des nucléotides marqués et non marqués pour former une queue poly-A

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22
Q

Quel est le principe du marquage en 3’ unique?

A

La terminal-transférase rajoute un seul nucléotide (dddUTP -) pas de OH)pour permettre de limiter les faux positif

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23
Q

Qu’est-ce que le marquage par sondes d’ARN?

A
  • Utilise un plasmide avec un promoteur T7 devant la séquence d’intérêt
  • ARNpolymérase synthétise un ARN messager avec des dUTP
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24
Q

Quelles sont les 2 méthodes de détection à la suite de l’hybridation de la sonde marquée avec la DIG?

A
  • Cheluminescence ou réaction colorimétrique
  • Fluorescence
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25
Q

Comment peut-on fabriquer un oligonucléotides pour une sonde à partir d’un séquence protéique?

A
  • On identifie la séquence d’acide aminé
  • On traduit le séquence en ADN
  • On utilise la séquence avec le moins de dégénérescence pour fabriquer la sonde
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26
Q

À quoi correspond la région ayant le moins de dégénérescence dans une séquence protéique?

A

Le nombre de codon possible est réduit au mininum pour pour chaque A.A. qui la compose (peu de codon pour un même acide aminé)

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27
Q

Qu’est-ce que le clonage positionnel par marche sur le chromosome

A
  • On débute en détectant une séquence A afin de trouvé le clone correspondant
  • DANs se clon on isone un autre fragment qui se trouve à côté, on utilise se fragment pour trouver le prochain clone et ainsi de suite jusqu’à avoir la séquence complète
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28
Q

Qu’est-ce que le clonage d’un gène par étiquetage?

A
  • À l’aide de Tag DNA
  • Insertion d’un ADN qui transforme le gène pour étiqueté le gène et l’isoler
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29
Q

Est-ce que l’ADN peut être utilisé comme sonde?

A

oui

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30
Q

Lorsqu’on fait un gel d’électrophorèse avec des clones d’ADn digérés par enzyme de restriction, que signifie une bande qui serrait présente dans chaque clone?

A

Un plasmide

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31
Q

Qu’arrive-t-il quand on utilise de l’ADN génomique digérée par enzymes de restriction pour fair eun électrophorèse?

A

Il va y avoir un smear -) flou du à une grande quantité de morceaux de toutes les tailles

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32
Q

Que permet de faire un électrophorèse des clones d’ADN?

A
  • On transfert sur une membrane
  • Pour pouvoir
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33
Q

Quel est l’Étape à effectuer dans un southern ou un northern lorsqu’on obtient la membrane?

A
  • Pré-hybridation
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34
Q

En quoi consiste l’étape de la pré-hybridation de la membrane?

A
  • Saturation à l’aide d’ADN exogène
  • Dénaturation avec formaldhéide + NaOH
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35
Q

Qu’est-ce que RpS7?

A

Protéine ribosomale toujour présente en quantité similaire dans les cellules qui sert de loading contrôle

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36
Q

QUe perment le séquençage d’ADN?

A

Déterminer la séquence d’un gène cloné à l’aide de didéoxynucléotides

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36
Q

Qu’est-ce qu’un didésoxynucléotides?

A

Nucléotide qui ne contient pas d’extrémité 3’-OH
Rien ne peut s’y accrocher

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37
Q

Combien de réactions sont nécessaire à la méthode de Fred Sanger?

A

4 réactions, une pour chaque nucléotide ATCG

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37
Q
A
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38
Q

Comment lire un gel d’électrophorèse de la éthode de Sanger?

A

On lit les bandes des plus petites aux plus grandes, chaque bande à une différence d’un nucléotide, ce qui permet de reconstruire la séquence

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39
Q

Jusqu’à combien de paire de base peut lire un séquenceur automatique de la méthode de Sanger?

A

1Kb

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40
Q

Par quoi est marqué l’ADN dans la méthode Sanger?

A

au 32P

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41
Q

Quel élément est nécessaire à la méthode de sanger?

A
  • ADN simple brin
  • Amorces
  • ADNpolymérase
  • dNTP
  • ddNTP
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42
Q

Qu’est-ce que le pyroséquençage?

A

Technique de séquençage de l’ADN qui se base sur la détection de la libération de pyrophosphate (PPi) lorsqu’un nucléotide est incorporé dans une chaîne d’ADN en cours de synthèse

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43
Q

Sur quoi repose le pyroséquençage?

A

repose sur la détection de la lumière produite lors de la synthèse de l’ADN

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44
Q

Quels éléments sont nécessaire à ajouter dans un réaction de pyroséquençage?

A
  • ADN polymérase
  • ATP sulfurylase
  • Luciférase
  • Apyrase
  • APS (adénosine 5’ phosphosulfate
  • Luciférine
  • Amorce
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45
Q

Qu’arrive-t-il lors de l’ajout d’un dNTP lors du pyroséquençage?

A
  • l’ADN polymérase catalyse l’incorporation du nucléotide complémentaire, chaque incorporation mène à la libération de pyrophosphate (iPP)
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46
Q

Qu’arrive-t-il lors de la libération du PPi lors du pyroséquençage?

A

L’ATP sulfurylase convertit le PPi en ATP en présence d’adénosine 5’phosphosulffate (APS)

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47
Q

Qu’entraine la création d’une molécule d’ATP lors du pyroséquençage?

A

Conversion médiée par la luciférase de luciférine en oxyluciférine qui génère de la lumière visible

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48
Q

Par quoi est détectée la lumière produite dans le pyroséquençage?

A

Une caméra couplée (CCD)

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49
Q

À quoi est proportionnel la hauteur de chaque pic dans un pyrogram?

A

Au nombre de nucléotides incorporés

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50
Q

Qu’arrive-t-il aux nucléotides qui ne sont pas utilisés lors d’un cycle de pyroséquençage?

A

ILs sont dégradés par l’apyrase, en plus de l’ATP

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51
Q

Quel nucléotide particulier est utilisé dans le pyroséquençage et pourquoi?

A
  • Désoxyadénosine alfa-thio triphosphae (dATP-S)
  • Utilisée efficacement par l’ADN polymérase mais pas reconnue par la luciférase
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52
Q

Qu’est-ce qui est essentiel de connaitre avant de débuter un PCR?

A

La séquence au début du brin d’ADN

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53
Q

Quel type de PCR utilise le SYBR green?

A

Real-time PCR

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54
Q

Comment fonctionne le real-time PCR avec SYBR green?

A

La Taq polymérase synthétise un nouveau simple brin d’ADN
La formation d’un double brin permet au SYBR green de se lier et d’émettre de la lumière
La fluorescence augmente au fur et a mesure que le brin est formé et que le SYBR green est créé

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55
Q

DE quoi est composé la sonde TaqMan?

A
  • Une séquence complémentaire à une séquence dans le brin d’ADN
  • Un fluorophore en 5’
  • Un quencher en 3’
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56
Q

Qu’arrive-t-il à la sonde TaqMan dans le PCR?

A
  • AU départ, elle se fixe au brin d’ADN
  • La Taq polymérase synthétise le brin jusqu’à ce qu’elle arrive à la sonde
  • Elle la dégrade, séparant le fluorophore et le quencher
  • La libération du fluorophore cause sa fluorescence
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57
Q

Comment le quencher peut inhiber la fluorescence du fluorophore?

A

Par effet de proximité lorsque la sonde est proche

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58
Q

Qu’est-ce que la RT-PCR?

A

PCR qui débute avec de l’ARN
Elle utilise la transcriptase inverse pour transformer l’ARN en ADNc, qui est ensuite utilisé dans le PCR

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59
Q

QUe permet la mutagénèse dirigée?

A

Permet de créer des mutations au niveau de n’importe quel site spécifique dans un gène dont on connaît la séquence de type sauvage

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60
Q

La mutagénèse est un principe d’utilisation de quoi?

A

D’oligonucléotides qui s’hybrident avec des fragments simple brin

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61
Q

Quel fragments d’ADN simple brin est utilisé dans la mutagénèse dirigée in vitro?

A
  • Phage M13 simple-brin
  • Vecteurs double-brin dénaturés
62
Q

Quels sont les types de mutations que l’On peut provoquer?

A
  • Oligonucléotide directed mutagenesis
  • Cassette replacement
  • Délétion
  • Set de délétion
  • Mutagénèse par PCR
63
Q

Quelles mutations entre dans les oligonuclétide directed mutagenesis?

A
  • Substitution des paire de base
  • Insertion
  • Délétion
64
Q

Qu’est-ce que la substitution des paires de base?

A

L’oligonucléotide se lie à une séquence non complémentaire (A-C) le brin est synthétisé mais lors de la réplication, certain mutant sont A-T et d’Autres sont C-G

65
Q

QU’est-ce que l’insertion?

A

Une courte séquence d’oligonucléotide est ajouté (Loop), cela ralonge le double brin du plasmide

66
Q

Qu’est-ce que la délétion?

A

Un oligonucléotide se lie au brin mais il ne relie pas tous les nucléotides, qui disparaissent lors de la réplication

67
Q

Qu’est-ce qu’un remplacement de cassette?

A

On remplace une séquence ADN double brin complet par un autre

68
Q

Qu’est-ce qu’une délétion (2 brins)

A

On retire complétement une séquence d’ADN double brin sans la remplacer

69
Q

Qu’est-ce qu’un set of deletion?

A

LE double brin est coupé chimiquement bloqué, il y a errosion par nucléase de l’autre bout, se qui retire des nucléotide et cause un délétion

70
Q

QU’est-ce que les RFLP?

A

REstriction fragment length polymorphism (polymorphisme de longueur des fragments de restriction)

71
Q

Comment identifier les RFLP?

A

DE façon empirique en hybridant systématiquement un grand nombre de fragments génomiques clonés, obtenus après digestion par des enzymes de restriction, de l’ADN de plusieurs individus distincts d’une même famille ou d’une population

72
Q

Est-ce que ls RFLP ont une importance biologique?

A

Pas dans la plupart des cas

73
Q

à quoi peuvent servir les RFLP?

A
  • Utiliser pour déterminer la position de gènes intéressants et servir de point de départ pour cloner ces gènes par la technique du clonage positionnel
74
Q

QUe permet la génétique inverse?

A

Permet de découvrir le rôle normal de séquences inconnues d’ADN ou de protéines, en mutant leur séquence in vitro et en cherchant les changements induits au niveau phénotypique

75
Q

Quelles sont les étapes de la génétique inverse?

A
  • Séquence de la protéine
  • SÉquenc de l’ADN
  • Allèle mutant
  • Phénotype mutant
76
Q

Les RFLP peuvent être utilisé pour mesurer la divergence de quoi?

A

La divergence génétique netre les populations différents ou des espèces apparentées

77
Q

LA mesure du nombre total de différence de RFLP représente quoi?

A

Mesure de la différence génétique

78
Q

Comment sont utilisé les RFLP dans une maladie?

A

Ils peuvent être utilisé dans la détection d’un allèle conférant la maladie

79
Q

Qu’est-ce que le CMH?

A
  • Complexe majeur d’histocompatibilité
80
Q

De quoi est constitué le CMH?

A

15 différents gènes qui sont extrêmement polymorphique

81
Q

ESt-ce que la probabilité que 2 individus aient la même combinaison d’allèle dans le CMH estgrande?

A

FAible car il y a plus de 500 allèles différents qui ont été découvert

82
Q

LE CMH ce retrouve où?

A

À la surfac des APC (antigen-presenting cell)

83
Q

e

Est-ce que toutes les cellules peuvent être de APC?

A

OUI
Mais les professionnel sont les macrophage, les cellules dendritiques et les cellules B

84
Q

Par quoi interagissent les cellules T avec les APC?

A

Via leurs récepteurs TCR et CD

85
Q

Qu’Est-ce que le polymorphisme?

A

Forme différente que peut prendre un même gène

86
Q

COmment s’effectue la génétique inverse sur un gène?

A
  • Clonage d’un gène
  • Mutagenèse in vitro
  • Réinsertion dans organisme de départ
  • Conséquence sur le phénotype
87
Q

Comment s’effectue la génétique inverse sur une protéine?

A
  • SÉquençage d’une protéine
  • DÉduction de la séquence ADN
  • Fabrication d’une sonde
  • Criblage d’une banque d’ADNc
  • Mutagenèse in vitro
88
Q

QUe permet un knock out?

A

Inactiver complètement un gène

89
Q

De quelle manière s’effectue un knock out et pourquoi?

A
  • Par l’intégration homologue d’une séquence contenant un marqueur sélectionnable
  • Permet d’inactiver une gène spéccifique tout en étant capable de sélectionner un phénotype particulier
90
Q

Qu’est-ce qu’un organisme transgénique?

A

Organisme contenant de l’ADN étranger

91
Q

Nommez 2 exemples d’expression de gènes eucaryotes dans des bactéries.

A
  • Insuline
  • hGH
92
Q

Comment est effectué l’expression de l’insuline dans une bactérie?

A
  • Mettre les 2 gènes dans 2 plasmide différents, collé à la b-gal
  • Produire la b-gal-insuline (prot de fusion)
  • Les purifier
  • séparer l’insuline de la b-gal
  • Reconstruire le complexe avec les 2 insuline
93
Q

Pourquoi il faut faire attention à l’orientation d’un insert?

A

Car s’il est dans le mauvais sens, la protéine produite ne sera paps la bonne

94
Q

Comment s’Assurer que l’insert soit dans le bon sens?

A

Couper avec 2 enzymes de restriction

95
Q

Comment l’ADN est introduit dans une cellule eucaryote?

A
  • Transformation
  • Transfection
  • Injection
  • Infection virale
  • Bombardemnet au tungstème
95
Q

Comment peut se répliquer un ADN exogène?

A

Il doit s’insérer dans le génome de la cellule eucaryote

95
Q

Que possède la levure?

A

Un plasmide circulaire naturel de 6,3Kb qui est transmis à la descendance lors de la réplication

96
Q

Quel est l’avange de la levure par rapport aux plasmides bactériens?

A

Les chormosomes artificiels de levure peuvent atteindre jusqu’à 1000 Kb

97
Q

Quels sont les types de plasmide chez les levures?

A
  • Plasmide intégratif
  • Plasmide épisomal
  • Plasmide centromère
  • Yeast artificial chromosome
98
Q

Quel est la particularité du plasmide de levure intégratif?

A

Il ne peut se répliquer
(intrégration au chromosome pour une transformation stable)

99
Q

Est-ce que le plasmide épisomal peut se répliquer?

A

Oui

100
Q

Quelle est la particularité des plasmides centromères?

A

Possède un centromère de levure
Ils permettent aux cellules filles de toutes avoir le plasmide

101
Q

Quelle est la particularité du yeast artificial chromosome?

A

Il possède des télomères

102
Q

Quel est le principe de la technologie Tet-On?

A

Il s’agit d’un transactivateur à la doxicycline
- En absence de Dox, le transactivateur ne se lie pas au promoteur et la transcription par la polymérase n’est pas activé
- Plus il y a de doxicycline présente, plus il y a de protéines exprimées

103
Q

Que permet de faire une analyse de délétion in vitro?

A

Permet de déterminer la région régulatrice essentielle d’un gène (Quelle partie est déterminante pour le phénotype X+ ou X- par exemple)

104
Q

Comment est effectué une analyse de délétion in vitro?

A

On prend la région régulatrice et on rentire petit a petit chaque partie, que l’on entre ensuite dans un plasmide en le liant à b-gal pour identifier la protéine qui en resort

105
Q

Quels organismes sont les plus utilisés dans le génie génétique chez les animaux?

A
  • Caenorhabditis elegans
  • Drosophile
  • Souris
106
Q

Qu’est-ce qu’un gène rapporteur?

A

Gène qui permet d’étudier l’expression et la régulation d’un autre gène
Crée un produit facile à détecter ou à mesurer, ce qui permet d’évaluer indirectement l’activité du gène d’intérêt

107
Q

Le gène de quel protéine est souvent utilisé comme gène rapporteur?

A

Le gène de la B-gal

108
Q

Pourquoi une des deux drosophiles est bleue?

A
  • Il s’Agit de drosophiles transgéniques qui exprime le gène bactérien de la b-gal sous le promoteur du choc thermique de drosophile
  • Cela signifie que la b-gal est produite uniquement lorsque la drosophile est en choc thermique
  • la drosophile bleu en a subit un
109
Q

Quel est le principe des souris chimères?

A

Il s’agit de souris transgéniques contenant le gène de la méduse qui code la protéine GFP inséré dans leur génome

110
Q

Comment produire une protéine recombinante dans le lait d’une brebis transgénique?

A

1) Prendre le gène et le mettre dans un plasmide avec promoteur spécifique à la glande mammaire
2) Insertion dans l’ovule fécondé d’une brebis
3) Naissance du bébé qui est transgénique et expression du gène dans le lait de la brebis

111
Q

Comment à été créé Dolly?

A
  • Prélèvement du noyau de l’organisme donneur
  • On retir le noyau de l’ovule
  • Fusion du noyau avec l’ovule énucléé
  • Développement de l’ovule puis implantation dans la brebis porteuse
112
Q

Qu’est-ce que CRE?

A

Cyclization Recombination : gène qui code pour un ADN recombinase site-spécifique

113
Q

Qu’est-ce que loxP?

A

Locus of X-over P1 : gène qui provient du bactériophage P1
Possède 34 paire de base

114
Q

Qu’est-ce qu’une recombinase?

A

Protéine qui veux faire l’excision du morceau pour le remplacer par un autre, s’il n’y a pas d’autres morceau, le morceau est quand même perdu

115
Q

Comment fonctionne le système CRE/LOX?

A
  • Lorsque la cre recombinase détecte la séquenc nucléotidique qui correspond au extrémités du gène loxP, elle se lie à ceux-ci et exice une parti du gène
116
Q
A
117
Q

Qu’est-ce qu’un knockin?

A

Expression d’une protéine mutant avec fonction différente de la protéine de type sauvage

118
Q

Comment peut être activé le système CRE/LOX chez une souris?

A

Il faut que l’un de ses parents possède le gène de la cre recombinase et que l’autre possède le gène des loxP
Alors, la souris possède les deux dans certains tissu (utérus) et le système est actif

119
Q

COmment sont fabriqués les saumons d’épicerie?

A

Introduction d’un complèse transgénique hormonal sous le contrôle d’un promoteur fort

120
Q

Quel promoteur fort est utilisé chez les saumons du pacifique pour augmenter leur croissance?

A

Métallothionéine

121
Q

Qu’est-ce que la thérapie génique germinale?

A

Insertion d’une cellule transgénique dans le bouton embryonaire du blastocytes

122
Q

Pourquoi la thérapie génique germinale est controversée chez l’homme?

A

PAre qu’il peut provoquer l’insertion de copies du gène d’intérêt à des endroits dans le génome pouvant perturber d’autres gènes

123
Q

Quel sont les 3 types de thérapie génique chez l’homme?

A
  • Injection d’oeuf fertilisé
  • therapie germinale
  • Therapie somatique
124
Q

Qu’est-ce que la thérapie génique somatique?

A

Correction d’un phénotype par le traitement de quelques cellules somatiques chez la personne atteinte

125
Q

À quoi s’applique la thérapie génique somatique?

A

Aux maladies dont le phénotype est causé par des gènes exprimés de façon prédominante dans un tissu

126
Q

En quoi consiste la technique de thérapie génique somatique?

A
  • Prélever des cellules d’un malade avec génotype déficient
  • REndre ces cellules transgéniques grâce à l’introduction de copies du gène cloné de type sauvage
  • CEllules ensuite réintroduites dans le corps malade et la fonction normale du gène s’y exerce
127
Q

Quels sont les 2 moyens d’introduire le transgène dans les cellules pour la thérapie génique somatique?

A
  • Rétrovirus inactivé, lentivirus
  • Adénovirus
128
Q

Quels sont les 2 problèmes de l’utilisation de rétrovirus inactivé pour introduire un transgène dans les cellules pour la thérapie génique somatique?

A
  • Doit s’insérer dans le génome de la cellule hôte donc efets mutagènes
  • S’attaque aux cellules en prolifération seulement
129
Q

Quels sont les 2 avantages de l’utilisation d’adénovirus pour introduire un transgène dans les cellules pour la thérapie génique somatique?

A
  • Ne s’intègre pas dans le chromosome de l’hôte
  • Attaque tous les types de cellules même celles qui ne prolifèrent pas
130
Q

Quel autre transporteur peut être utilisé dans la thérapie génique?

A

Transporteur non-viral : liposomes

131
Q

Comment fonctionne les liposome dans la thérapie génique?

A
  • Les liposomes encapsulent de l’ADN souvent sous forme de plasmide
  • Ils entrent dans la cellule cible et libèrent leur contenu dans le cytoplasme
  • L’ADN est dirigé vers le noyau pour être ensuite exprimé
132
Q

Quelle affection fu traité par la première thérapie génique?

A

Syndrome de l’immunodéficience congénital
- Altération du gène de l’adénosine désaminase

133
Q

Quel transporteur à été utilisé dans la première thérapie génique pour traiter le SCID?

A

Rétrovirus

134
Q

Quel type de cellules ont été utilisé dans la thérapie génique pour le SCID?

A

Cellules de la moelle osseuse plus efficace
Ou blood cells

135
Q

Quels sont les différents type de vecteur dans la thérapie génique?

A
  • Rétrovirus
  • Adenovirus
  • Adeno-associated virus
  • Herpesvirus
  • Liposomes
  • Nanoérytrhosomes
136
Q

Quel sont les avantages des rétrovirus dans la thérapie génique?

A
  • Entre efficacement dans les cellules
  • PAs de gènes viraux
  • Intégration stable
137
Q

Quel sont les désavantages des rétrovirus dans la thérapie génique?

A
  • DIfficile à produire
  • Taille d’insert limité
  • Mutagénèse random
138
Q

Quel sont les avantages des adénovirus dans la thérapie génique?

A
  • Entre efficacement dans la cellule
  • Grande expression de gènes thérapeutique
  • Ne s’intègre par dans le chromosome de l’hôte
139
Q

Quel sont les désavantages des Adénovirus dans la thérapie génique?

A
  • Les gènes viraux doivent être dans le vecteur
  • Induit une réponse immunitaire
140
Q

Quel sont les avantages des adeno-associated virus dans la thérapie génique?

A
  • S’intègre dans un chromosome à un site particulier
  • Ne produit pas de réponse immunitaire
141
Q

Quel sont les désavantages des adeno-associated virus dans la thérapie génique?

A
  • Difficile à produire
  • PEtite taille d’insert permise
142
Q

Quel sont les avantages des herpesvirus dans la thérapie génique?

A
  • Produit en grande quantité
  • Targets les nondividing nerve cells
143
Q

Quel sont les désavantages des herpesvirus dans la thérapie génique?

A
  • Difficile à produire
  • Gène viral requis
144
Q

Qu’est-ce que le HAC?

A

Chromosome artificiel humain : autre moyen pour introduire un transgène

145
Q

COmment est transfecté le HAC?

A

À l’aide d’Agents de transfetion (lipofectine, transfectine, effectine)

146
Q

Comment peut-on observer le HAC?

A

À l’Aide de sondes par fluorescence

147
Q

Qu’est-ce que l’interférence ARN?

A

Processus post-transcriptionnel qui rend de manière séquence spécifique, un gène silencieux

148
Q

Quelles sont les molécules impliquées dans l’interférence ARN?

A
  • dsRAN
  • siRAN
  • Complexe RISC
149
Q

Comment se déroule l’interférence RNA?

A
  • les dsRAN sont clivé par une enzyme (Dicer) en cours fragments (21-23), les siRNA
  • Les siRNA se lie au complexe RISC, qui dégrade un des deux brins et utilise l’autre pour cliver la séquence d’ADN ciblé
  • ARN ciblé est ensuite dégradé
150
Q

Qu’est-ce que TALENs?

A
  • Transcription activator-like effector nucleases
  • DÉrivées de protéines de parasites qui peuvent reprogrammer l’expression génique chez les plantes hôtes
151
Q
A

Biologie moléculaire (4 decks)

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