Etapas Del Dx Molecular

Question 1

¿Qué es el diagnóstico molecular?

Answer 1

Aplicación de técnicas de biología molecular detectando y cuantificando secuencias genéticas específicas

Identificación de biomarcadores — mejores pruebas dx y tx

Question 2

Etapas del diagnóstico molecular

Answer 2

Etapa preanalíica
Etapa analítica
Etapa postanalítica

Question 3

¿En qué consiste la etapa preanalítica?

Answer 3

Solicitud de análisis
Rotulación adecuada de la muestra
Instrumentos que causen menor número de lesiones
Extracción ADN - 3 ml sangre - proceso
Selección muestra = pruebas de diagnóstico molecular

Question 4

Las pruebas de diagnóstico molecular se clasifican en:

Answer 4

• Estructura genómica (detección de ADN): mutaciones y polimorfismos, muestra de sangre (leucocitos de sangre periférica)
• Expresión génica (detección de ARNm): espacial y temporal, muestra de zona específica
• Detección de genomas extraños (genomas de virus y bacterias): técnica PCR establece la patología, muestra de sangre periférica

Question 5

¿Cuáles son las características de la expresión génica espacial y temporal?

Answer 5

• Espacial: según la cél y función a explorar
  Ej. Insulina - cél beta pancreática exclusiva
• Temporal: según estado metabólico del px
  Ej. niño, adulto mayor, enfermo o sano

Question 6

¿En qué consiste la etapa analítica?

Answer 6

Determina, mide y describe la presencia o ausencia de sustancias
Procesamiento de muestra
Posibilidad de resultados incorrectos
Controles positivo y negativo

Question 7

¿En qué consiste la etapa post-analítica?

Answer 7

Evaluación e informe
Resuelve

Question 8

¿Cuáles son las diferencias entre el dx tradicional y el molecular?

Answer 8

Tradicional
- Basado en antecedentes y clínica
- Fallo en tx
- Ineficiencia = + tiempo perdido
- Infección: dificultades por tiempos de crecimiento, condición cultivo y obtención muestra
- Cáncer: mayor índice de falsos positivos, uso de pruebas no útiles

Molecular
- Probabilidad de recurrencia real
- Minimiza errores, tx personalizado y atinado
- Detección múltiple + eficiencia = + tiempo ahorrado
- Infección: tx de elección + sensible y específico y + rápido
- Cáncer: mayor sensibilidad y especificidad, tx adecuado

Question 9

Tratamiento con dx molecular

Answer 9

Sensibilidad 70-99%
Especificidad 86-100%

1. Diseño de cebadores
2. Cantidad ADN polimerasa
3. Cantidad y calidad ADN

Question 10

Diferencia entre falsos positivos y negativos

Answer 10

Positivos: combinación de muestras, combinación de fármacos

Negativos: acción ADNasas o ARNasas, hidrolizan enlaces, muestra ya no es suficiente o está alterada

Question 11

¿A qué se refiere y cómo se aplica la validación en las pruebas?

Answer 11

Proceso que establece especificaciones concretas de un test
- Validación analítica: exactitud con la que test identifica mutaciones o genotipo de interés, incluye sensibilidad y especificidad

• Validación clínica: capacidad de test de especificar o predecir presencia o ausencia de enf

Question 12

¿Qué son las pruebas primarias y cuáles son?

Answer 12

Aquellas que requieren de otro proceso para visualizar el resultado

Fijación del complemento
Inmunofluorescencia
Pruebas inmunoenzimáticas - ELISA
Western Blot
Radioinmunoensayo
Inmunocromatografía

Question 13

¿Qué son las pruebas secundarias y cuáles son?

Answer 13

Son…

Pruebas de precipitación
Pruebas de aglutinación

Question 14

¿Por qué el complemento = hemólisis?

Answer 14

Si complemento no se una a Ag (porque no está presente en muestra) va a quedar libre, por lo que se fija al eritrocito. Complemento hemoliza a los eritrocitos

Question 15

¿Qué permite saber si se dió la unión del ac al Ag en Western Blot?

Answer 15

La radiactividad elevada
Se detecta usando marcador radiactivo o químico

Question 16

¿Cómo se reportan los resultados de una ELISA?

Answer 16

Por medio de diluciones y color
Si color permanece dspués de muchas diluciones — “mucho Ag/mucho ac”
También se puede cuantificar x medio de espectrofotómetro y graficar curva con resultados de diluciones

Question 17

Diferencia entre ELISA directa, indirecta y sándwich

Answer 17

Directo: rápido y simple, ac primario marcado con enzima se une directamente al ag, permitiendo detección y/o cuantificación

Indirecto: en dos pasos, amplifica señal obtenida, se usan 2 ac, primario y secundario, y el segundo se va conjugado a una enzima

Sándwich: ag queda inmovilizado entre 2 ac, 1 de captura y otro de detección (pares de ac), que se unirán a 2 epítopos diferentes de 1 mismo ag

Question 18

¿Cuál de los tipos de ELISA es más específico? Y, ¿por qué?

Answer 18

ELISA sándwich porque tiene + ac dirigidos específicamente a objetivo y le da + especificidad a la prueba

Question 19

Modificaciones postraduccionales que pueden hacerse con Western Blot

Answer 19

Acetilación
Fosforilación
Citrulinación
Por ac específicos

Question 20

Pasos del Western Blot

Answer 20

1. Se hace electroforesis donde se separan todas las proteínas según su peso
2. Se hace transferencia de gel a membrana + firme
3. Incubación y bloqueo
4. Se añade ac primario
5. Lavado, donde se eliminan ac que no se unieron
6. Se añade ac secundario, específico para el ac primario
   a. Este cuenta con enzima
7. Lavado
8. Detección de proteína de interés x medio de señal quimioluminiscente
   a. Se añade sustrato que reacciona con enzima del ac secundario

Question 21

¿Qué es serología?

Answer 21

Estudio de ac en suero sanguíneo

Question 22

¿Qué son las pruebas serológicas?

Answer 22

Analizan componente sérico de sangre que incluye ac contra componentes específicos de patógenos (Ag)

Question 23

¿Cómo se clasifican las pruebas serológicas?

Answer 23

Según lo que investigan
- Directas: buscan Ag
- Indirectas: buscan ac

Según procedimiento
- Primarias: reacción no visible
- Secundarias: reacción es visible

Question 24

¿Qué es un antígeno (Ag)?

Answer 24

Molécula de procedencia exógena o endógena que resulta “extraña” al organismo
Unido por ac o receptor de célula

Question 25

¿Qué es un anticuerpo (ac)?

Answer 25

Proteína producida por linfocitos B en respuesta a antígeno

Question 26

¿Qué es un epítopo o determinante antigénico?

Answer 26

Sitio o porción inmunodominante de un Ag, a través del cual se une con ac o con receptor de linfocito T

Question 27

¿Qué es la reacción Ag-Ac?

Answer 27

Reacción inmune producida cuando ac reconocen a Ag
Formación complejo Ag-Ac