CRISPR Flashcards
¿Qué significa CRISPR?
Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats
Repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y espaciadas regularmente
¿Qué es CRISPR?
Técnica de modificación genética, usada en el sistema de defensa en procariotas
Familia de secuencias de ADN de origen procariota
¿Qué es CRISPR/Cas9?
Está dirigida a secuencias de genes para modificar el genoma de organismos vivos
Es una terapia génica en la que se busca silenciar o expresar genes mediante su modificación genética (deleción, inserción, corrección, disfunción
¿Qué es una secuencia palindrómica?
Secuencia que se lee de misma manera en un sentido y otro
¿Qué son los espaciadores?
Pertenecen a segmentos de ADN de virus o plásmidos
Es una región que no transcribe y se localiza entre genes que sí se transcriben
¿Qué es Cas?
Enzima que hidroliza enlaces fosfodiéster de cadenas de ác nucleicos
Inmunidad adaptativa en CRISPR/Cas9 y clasificación
Mecanismo de defensa de bacterias contra invasión de ác nucleicos derivados x bacteriófagos o plásmidos
Clasificación
- Diferencia entre secuencia
- Estructura de proteínas Cas
Componentes de inmunidad adaptativa Tipo II
- Proteína Cas9
- 2 dominios que permiten corte:
+ RuvC + HNH
+ Dominio de interacción a PAM - CRISPR ARN (crARN)
- Transactivación crARN (tracrARN)
Etapas inmunidad adaptativa Tipo II
- Adquisición CRISPR
a. Captura ADN invasor en locus CRISPR
+ posiciones adyacentes a secuencia PAM
b. Cas1 + Cas2 - procesan en pequeños fragmentos e insertan en CRISPR (5´ de cadena complementaria) - Biogénesis del crARN
a. Se transcribe a precursor largo de CRISPR ARN = pre-crARN
b. tracrARN se fija a repeticiones + ARNase
c. ARN de espaciador + repetición + tracrARN = cr:tracrARN
d. Cas9 lo toma - guideARN - Interferencia con ADN invasor
a. gARN corta secuencia de ADN viral - degradación del virus
¿Cuál es el uso de CRISPR/Cas9?
Romper en lugar específico de secuencia de ADN para hacer modificaciones genéticas
¿Cuáles son los tipos de modificaciones genéticas que puede hacer CRISPR/Cas9?
Knockouts
Knockings
Reemplazos
¿Qué es un knockout y cuáles son sus funciones?
Eliminación de secuencia de ADN NHEJ (reparación de extremos no homólogos)
Desactiva expresión génica, elimina elementos reguladores, cambia estructura y función de proteínas
¿Qué es un knocking y cuáles son sus funciones?
Inserción de secuencia de ADN
Bloquea la función de genes mediante inserción y activa genes indicadores de proteínas fluorescentes, sin desactivar gen objetivo
¿Cuál es la función de un reemplazo?
Bloquear la función del gen y activar la de uno nuevo
Ingeniería genética con CRISPR/Cas9
Rotura de ADN en genoma puede repararse mediante:
NHEJ (reparación por unión de extremos no homólogos): eliminación gen específico sin su reparación
HDR (reparación dirigida por homología): requiere ADN propio del px para recuperar/reparar parte perdida
¿Cuáles son los vectores + usados capaces de integrar material genético ectópico en células?
Retrovirus, lentivirus y virus adenoasociados
Transposones de ADN son elementos móviles que se integran en genoma del huésped mediante mecanismo de cortar y pegar
Vectores
Transposón Sleeping Beauty
Genera líneas celulares T que expresan receptores de ag quiméricos que reconocen ag específicos de tumores y cél madre humanas primarias transgénicas
Transposón Piggyback
Genera células madre pluripotenciales inducidas (iPSC)
Una vez reprogramado transgén puede eliminarse mediante otra roña de act transposasa PB, sin dejar rastro genético de integración o escisión
¿Qué son y para qué sirven los PAM?
PAM = Motivo adyacente protoespaciador
Secuencia corta que debe estar presente junto a secuencia de ADN para que Cas9 se una y corte
sgRNA
Single guide RNA que contiene crRNA y tracrRNA
crRNA - secuencia homóloga a región del gen de interés y que guía a Cas9 para corte
tracrRNA
Transactivating crRNA
Secuencia de ARN que es parcialmente complementaria al crRNA
Contribuye a su maduración, tmb se une a Cas9
