CRISPR

Question 1

¿Qué significa CRISPR?

Answer 1

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats
Repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y espaciadas regularmente

Question 2

¿Qué es CRISPR?

Answer 2

Técnica de modificación genética, usada en el sistema de defensa en procariotas
Familia de secuencias de ADN de origen procariota

Question 3

¿Qué es CRISPR/Cas9?

Answer 3

Está dirigida a secuencias de genes para modificar el genoma de organismos vivos

Es una terapia génica en la que se busca silenciar o expresar genes mediante su modificación genética (deleción, inserción, corrección, disfunción

Question 4

¿Qué es una secuencia palindrómica?

Answer 4

Secuencia que se lee de misma manera en un sentido y otro

Question 5

¿Qué son los espaciadores?

Answer 5

Pertenecen a segmentos de ADN de virus o plásmidos
Es una región que no transcribe y se localiza entre genes que sí se transcriben

Question 6

¿Qué es Cas?

Answer 6

Enzima que hidroliza enlaces fosfodiéster de cadenas de ác nucleicos

Question 7

Inmunidad adaptativa en CRISPR/Cas9 y clasificación

Answer 7

Mecanismo de defensa de bacterias contra invasión de ác nucleicos derivados x bacteriófagos o plásmidos

Clasificación
- Diferencia entre secuencia
- Estructura de proteínas Cas

Question 8

Componentes de inmunidad adaptativa Tipo II

Answer 8

1. Proteína Cas9
   - 2 dominios que permiten corte:
   + RuvC + HNH
   + Dominio de interacción a PAM
2. CRISPR ARN (crARN)
3. Transactivación crARN (tracrARN)

Question 9

Etapas inmunidad adaptativa Tipo II

Answer 9

1. Adquisición CRISPR
   a. Captura ADN invasor en locus CRISPR
   + posiciones adyacentes a secuencia PAM
   b. Cas1 + Cas2 - procesan en pequeños fragmentos e insertan en CRISPR (5´ de cadena complementaria)
2. Biogénesis del crARN
   a. Se transcribe a precursor largo de CRISPR ARN = pre-crARN
   b. tracrARN se fija a repeticiones + ARNase
   c. ARN de espaciador + repetición + tracrARN = cr:tracrARN
   d. Cas9 lo toma - guideARN
3. Interferencia con ADN invasor
   a. gARN corta secuencia de ADN viral - degradación del virus

Question 10

¿Cuál es el uso de CRISPR/Cas9?

Answer 10

Romper en lugar específico de secuencia de ADN para hacer modificaciones genéticas

Question 11

¿Cuáles son los tipos de modificaciones genéticas que puede hacer CRISPR/Cas9?

Answer 11

Knockouts
Knockings
Reemplazos

Question 12

¿Qué es un knockout y cuáles son sus funciones?

Answer 12

Eliminación de secuencia de ADN NHEJ (reparación de extremos no homólogos)
Desactiva expresión génica, elimina elementos reguladores, cambia estructura y función de proteínas

Question 13

¿Qué es un knocking y cuáles son sus funciones?

Answer 13

Inserción de secuencia de ADN
Bloquea la función de genes mediante inserción y activa genes indicadores de proteínas fluorescentes, sin desactivar gen objetivo

Question 14

¿Cuál es la función de un reemplazo?

Answer 14

Bloquear la función del gen y activar la de uno nuevo

Question 15

Ingeniería genética con CRISPR/Cas9
Rotura de ADN en genoma puede repararse mediante:

Answer 15

NHEJ (reparación por unión de extremos no homólogos): eliminación gen específico sin su reparación
HDR (reparación dirigida por homología): requiere ADN propio del px para recuperar/reparar parte perdida

Question 16

¿Cuáles son los vectores + usados capaces de integrar material genético ectópico en células?

Answer 16

Retrovirus, lentivirus y virus adenoasociados

Question 17

Transposones de ADN son elementos móviles que se integran en genoma del huésped mediante mecanismo de cortar y pegar

Answer 17

Vectores

Question 18

Transposón Sleeping Beauty

Answer 18

Genera líneas celulares T que expresan receptores de ag quiméricos que reconocen ag específicos de tumores y cél madre humanas primarias transgénicas

Question 19

Transposón Piggyback

Answer 19

Genera células madre pluripotenciales inducidas (iPSC)
Una vez reprogramado transgén puede eliminarse mediante otra roña de act transposasa PB, sin dejar rastro genético de integración o escisión

Question 20

¿Qué son y para qué sirven los PAM?

Answer 20

PAM = Motivo adyacente protoespaciador
Secuencia corta que debe estar presente junto a secuencia de ADN para que Cas9 se una y corte

Question 21

sgRNA

Answer 21

Single guide RNA que contiene crRNA y tracrRNA

crRNA - secuencia homóloga a región del gen de interés y que guía a Cas9 para corte

Question 22

tracrRNA

Answer 22

Transactivating crRNA
Secuencia de ARN que es parcialmente complementaria al crRNA
Contribuye a su maduración, tmb se une a Cas9