electroforesis y sanger

Question 1

ELECTROFORESIS:

Answer 1

Capacidad de desplazamiento en un campo eléctrico.
- a + → proteínas negativa migran más
Se deben separar por tamaño, pasan por los poros en el gel.
Pequeñas migran más rápido

Question 2

secuenciacion de sanger

Answer 2

Conocer el orden específicos de nucleótidos en una secuencia específica
Útil para mutaciones puntuales y las pequeñas inserciones y deleciones

Question 3

que se usa en sec sanger

Answer 3

Se usa enzimas de restricción, fluoróforos y electroforesis
Límite de hasta 900 nt
Sin degradación química
Se usa la enzima DNA polimerasa sin acción 5’ exonucleasa

Question 4

e usa la enzima DNA polimerasa sin acción 5’ exonucleasa
Deben tener

Answer 4

Muy buena procesividad
Actividad y eficacia en regiones homopoliméricas (palindrómicas)
Permiten secuenciar fragmentos largos y con menor error

Question 5

ddNTPs:

Answer 5

tienen H en lugar de OH en 3` → el OH permite continuar la cadena, al solo tener H se interrumpe y corta

Question 6

pasos sanger

Answer 6

Síntesis enzimática:
Aislar cadena molde → cebadores se pegan en 3`–> DNA polimerasa extiende la cadena y forma la complementaria con dNTPs

ddNTPs: genera fragmentos en cada secuencia de cadena molde que se comienza a extender

Análisis y separación de los fragmentos:
Se le añaden los ddNTP, pero la DNA polimerasa sólo la incluye si es complementaria con la cadena molde

Se corre en gel o electroforesis capilar: Según el orden de tamaño del fragmento en el gel: fragmentos más pequeños = nt más iniciales→ continuar el orden hasta encontrar toda la secuencia molde a partir de la complementaria

Automatización:
En una sola fila se separan los nucleótidos en el gel por el fluorocromo de color específico que se le añadió a cada uno de los ddNTP según la base que lo compone→ computadora con programa bioinformático detecta los fluorocromos y muestra toda la secuencia