Edition du génome

Question 1

Pourquoi la RH est pas favorisée chez C. glabrata ?

Answer 1

Parce qu’elle est haploïde, donc elle a pas vraiment de matrice pour faire de la recombinaison homologue

Question 2

A quoi ça sert de faire une coupure double brin dans le génome ?

Answer 2

A augmenter l’efficacité de NHEJ ou RH

Question 3

Comment fonctionne le Gibson Assembly ?

Answer 3

Par recombinaison homologue. On a 2 séquences qui possèdent une petite homologie entre elles. Une exonucléase va venir dégrader l’extrémité 5’ avec l’homologie puis il y a hybridation des 2 brins et une polymerase vient compléter les séquences puis une ligase vient assembler les 2 morceaux.

Question 4

Quel est le principe de la recombinaison homologue ?

Answer 4

Réparation d’une coupure double brin dans l’ADN à l’aide d’une matrice

Question 5

Comment fonctionne la RH ?

Answer 5

1. phase présynaptique avec préparation des extrémités (Senseurs Rad51, hélicases, pol, ligases)
2. synaptique avec recherche de séquence homologue et formation de jonctions holliday et migration des jonctions.
3. post-synaptique avec résolution des jonctions

Question 6

Quel est le principe du NHEJ ?

Answer 6

Réparation d’une coupure double brin dans l’ADN sans matrice

Question 7

Comment fonctionne le NHEJ ?

Answer 7

Reconnaissance des extrémités d’une casssure et maintien l’une de l’autre à proximité puis élémination des extrémités débordantes et ligation. Protéines Ku pour garder les extrémités ensemble + endonucléqe + ADN pol + ligase 4

Question 8

Quelles autres méthodes d’édition du génome ?

Answer 8

ZFN nucléases, TALENs et CRISPR-Cas9. Delitto perfetto et Cre-Lox

Question 9

Pourquoi ne pas avoir utilisé CRISPR-Cas9 ?

Answer 9

Parce qu’il y avait pas de PAM en 3’ de NRG1, donc on pouvait pas couper pour insérer le tag

Question 10

C’est quoi un plasmide centromérique ?

Answer 10

C’est un plasmide qui comporte un centromère et qui est donc répliqué comme un chromosome ce qui permet un maintient stable au sein des souches