DNA recombinante Flashcards
Son aminoácidos que existen en las proteínas solo bajo ciertas condiciones, por sus propiedades específicas:
Aminoácidos no canónicos
La N-formilmetionina, pirrolisina y selenocisteína son ejemplos de:
Aminoácidos no canónicos
¿Cómo ocurre la inserción de DNA recombinante en vectores de expresión?
- Se inserta un fragmento de ADN específico,en otro fragmento circular de ADN llamado plásmido.
- Este paso usa enzimas de restricción y ADN ligasa, y se llama ligación.
- Transferir el ADN a las bacterias en un proceso llamado transformación.
- Análisis de ADN para identificar las bacterias que contienen el plásmido que estamos buscando.
Es una secuencia de ADN que contiene sitios de restricción múltiples y únicos, el cual será utilizado para insertar el ADN heterólogo, cortan y pegan secuencias:
MCS (sitios de clonación múltiple con restricción de endonucleasas)
Enzima que corta ADN y que reconoce sitios específicos en él.
Enzima de restricción (sitios de restricción para endonucleasas)
Las enzimas de restricción dejan extremos cohesivos, ¿cuál es su función en la clonación?
Mantienen dos fragmentos de ADN juntos para que la ADN ligasa los pueda unir.
Las enzimas de restricción dejan extremos romos, cortes a la mitad de la secuencia blanco que no dejan extremos de cadena sencilla V/F:
Verdadero
¿Cuál extremo le es más fácil ligar a la ADN ligasa?
Cohesivos
Gen cuyo producto es fácilmente detectable o medible y puede usarse como un indicador de si una construcción de DNA se ha transferido con éxito.
Gen reportero
Al colocarlas en una placa con antibióticos, las bacterias sin plásmido:
Mueren
Al colocarlas en una placa con antibióticos, las bacterias con plásmido:
Forman una colonia
Usando ATP, la ___cataliza una reacción en la que el grupo fosfato del extremo 5’ de una cadena de ADN se une al grupo hidroxilo del extremo 3’ de la otra cadena. Esta reacción produce un esqueleto de azúcar-fosfato intacto.
ADN ligasa
Para la incubación de medios de cultivo, generalmente se utiliza:
Luria-Bertani Broth
¿Por qué es importante purificar las proteínas?
- Porque las células bacterianas pueden romperse para liberarla.
- Hay muchas otras proteínas y macromoléculas flotando en las bacterias además de la proteína blanco
¿Cuáles son las ventajas de las proteínas recombinantes?
- Son rápidas y baratas de producir
- Tienen rendimientos hasta el orden de mg/ml
- Purificación de proteínas en Buffer777
¿Cuáles son los métodos físico-químicos de separación de las proteínas?
Filtración de gel Interacción hidrofóbica Intercambio de iones Afinidad Fase de reversa
Es una técnica que permite la separación de moléculas diferentes presentes en una misma muestra:
Cromatografía
¿En qué consiste la filtración de gel?
Se hace pasar una mezcla de moléculas de distinto tamaño, a través de una columna de filtración en gel; con la entrada selectiva de las partículas de menor masa molecular
Cuando un elemento regulador específico aumenta de manera cuantitativa la expresión de la información genética, se dice que la regulación:
Positiva
Cuando la presencia de un
elemento regulador específico disminuye la expresión de la información genética, se considera
que la regulación es:
Negativa
El elemento o la molécula que media la regulación negativa se llama:
Represor/regulador negativo
El elemento que media regulación positiva es un regulador:
Activador/regulador positivo
Un doble negativo tiene el efecto de actuar como un positivo, V/F:
Verdadero
Muchos sistemas regulados que parecen ser inducidos, en realidad son desreprimidos en el ámbito molecular, V/F:
Verdadero
