DNA FORENSE

Question 1

Como funciona o processo de sequenciamento do tipo ilumina ou solexa?

Answer 1

Amplificação por pontes com inserção de adaptadores P5 e P7 , utiliza nucleotídeos marcados , acontece em placas com sucessivas lavagens que após a inserção dos nucleotídeos marcados irá fornecer fluorescência que irá ser detectada e montada a partir de um eletroferograma.

E uma técnica de amplificação com apenas 25 pb que em 4 dias de amplificação pode gerar FRAGMENTOS COM 120 GIGABASES , é muito demorado e uma técnica já ultrapassada.

Question 2

Como funciona a técnica de sequenciamento SOLID?

Answer 2

-Sequenciamento por ligação PROBES (SONDA).
- Sequenciamento por DNA LIGASE.
PASSOS:
A) Fragmentação - 60 a 90 pb , é usado adaptadores nas extremidades e no meio
B) Ligação dos adaptadores P1 e P2
C) Armazenado em bibliotecas genômicas até serem utilizados.
D) Sequenciamento - PCR por emulsão (microesferas)
E) ligação de adaptadores as microesferas
F) Placa
G) Lavagem com sondas marcadas
* 8 nucleotideos- 3’ fluoróforo
* 7 nucleotideos - 3’ fluoróforo
* 6 nucleotideos - 3’ fluoróforo
H) O sequênciamento se dará por SOBREPOSIÇÃO DAS SONDAS MARCADAS PELO FLUORÓFORO
OBS: NÃO UTILIZA A POLIMERASE ( ENTÃO NÃO É UM SEQUENCIAMENTO POR SÍNTESE), SOMENTE A LIGASE.

Question 3

O sequenciamento SOLID é um sequenciamneto por sìntese?

Answer 3

ERRADO, é um sequenciamento por sobreposição das sondas marcadas por fluoróforos.

Question 4

O que é doença monogênica?

Answer 4

São doenças que afetam um único gene , exemplo: Fibrose cística, anemia falciforme e doença de Huntington.

Question 5

O que é minissatélites (VNTR)?

Answer 5

Sequencia de 6 a 10pares de bases , predominante em regiões não codificantes (TELOMÉRICAS ).

Question 6

O que é microssatélites (STR)?

Answer 6

Sequência de 1 a 6 ou 10 pares de bases em TANDEM (AGRUPADAS) no qual vai variar o tipo ou a quantidade de repetição. UTILIZADO PARA AMPLIFICAÇÃO . USADO NA TRAGÉDIA DO WORLD TRADE CENTER PARA ENCONTRAR AS VÍTIMAS.

Question 7

Como ocorre a inativação do X ?

Answer 7

E um processo no qual umas das copias do cromossomo X em fêmeas é inativado. O cromossomo inativado recebe o nome de CORPUSCULO DE BARR e o mecanismo de ação utilizado é o GENE XIST

Question 8

O que é o STUTTER ou GAGUEJO?

Answer 8

São pequenos picos no eletroferograma que ocorre devido o deslizamento da DNA POLIMERASE que na hora a replicação deixa de colocar algum nucleotídeo.

Question 9

Quais são as etapas da amplificação por PCR?

Answer 9

• Desnaturação
• Anelamento do primer iniciador
• Extensão

Question 10

O que é o primer iniciador ?

Answer 10

Par de OLIGONUCLEOTÍDEOS de 8 a 30 pb se anela a uma região do DNA e então inicia na REGIAO 3’ OH LIVRE a complementariedade das bases nitrogenadas para amplificação (REGIAO STR).

Question 11

Quais são as temperaturas utilizadas para desnaturação na técnica de PCR?

Answer 11

Aos 95° ocorre a separação da dupla fita de DNA.
Aos 52° - 65° ocorre a diminuição da temperatura para o PAREAMENTO DOS INICIADORES.
Aumenta a temperatura para 72° para ocorrer o ALONGAMENTO DA CADEIA

Question 12

O que é a TAQ POLIMERASE?

Answer 12

Enzima termoestável utilizada para amplificação do DNA através da técnica de PCR.

Question 13

O que são as enzimas de restrição?

Answer 13

São utilizadas para cortar fragmentos do DNA

Question 14

O que é sequencoa de bases PALÍNDROMICAS?

Answer 14

É A MESMA COISA SE LER DE TRAS P FRENTE.

Question 15

O que são os PLAMÍDEOS?

Answer 15

É um tipo de vetor.

Question 16

Os nucleotídeos que compõem os SNPs (single nucleotide
polymorphisms), ou polimorfismos de nucleotídeo único,
sofrem mutações com menor frequência.

Answer 16

correto

Question 17

As sequências repetitivas encontradas no genoma, como,
por exemplo, CGG, se ocorrerem em regiões intrônicas, não
causarão prejuízo ao indivíduo e não poderão ser usadas
para identificação pessoal.

Answer 17

ERRADO, PODDE CAUSAR PREJUIZO.

Question 18

Um padrão intercalado de DNA
consiste de:

Answer 18

blocos alternados de DNA cópia única e DNA
moderadamente repetitivo.

Question 19

GRANDES DESASTRES QUAL MARCADOR É UTILIZADO?

Answer 19

STRS, DNA MITOCONDRIAL. OS SNPS QUE SÃO MUITO PEQUENOS PODEM SER UTILIZADOS MAS E TECNICA É MAIS ROBUSTA( SEQUENCIAMENTO).

Question 20

Os polimorfismos de comprimento incluem regiões que se
repetem no DNA genômico e são chamados de
microssatélites (STRs) e minissatélites (VNTRs).

Answer 20

CORRETO

Question 21

Os polimorfismos de sequência constituem-se de
diferentes nucleotídeos em uma determinada localização no
genoma, sendo que suas variações podem ser manifestadas
como regiões de alelos alternativos, substituições, adições
ou deleções de bases.

Answer 21

CORRETO, OS INDELS SOMENTE POR SEQUENCIAMENTO POR QUE O FRAGMENTO É PEQUENO, ENTÃO É DE SEQUENCIA.

Question 22

Os VNTRs (do inglês, Variable Number of Tandem
Repeats) são sequências curtas de bases que ocorrem em
números variáveis dentro do grupo de repetições in tandem.
O número de repetições encontradas varia de um local para
outro dentro do genoma e também varia entre indivíduos.
Podendo, assim, ser diferenciados pelo comprimento de
sequência VNTR do DNA

Answer 22

CORRETO

Question 23

Os STRs (do inglês, Short Tandem Repeats) são
nucleotídeos alinhados, em curtas repetidas, organizados
em sequência. Estes são trechos de DNA constituídos em
unidades repetidas de dois, três ou quatro nucleotídeos e
localizados dentro de regiões de sequência única com
número menor do que 100 pares de nucleotídeos. Cada
região genômica que contém determinado número de
repetições de uma sequência constitui um loco genético,
que varia entre os indivíduos e também é multialélico.

Answer 23

CORRETO

Question 24

As regiões STR (short tandem repeat) geralmente
apresentam bialelismo

Answer 24

ERRADO, MULTIALELOS

Question 25

O uso de locos de microssatélites ou short tandem
repeats (STRs) em genética forense deve-se à ausência de
taxa de mutação, pois a presença de mutação acarretaria
erros graves de interpretação nos resultados de análise de
amostras criminais por meio da tecnologia do DNA
recombinante.

Answer 25

ERRADO, PODE OCORRER MUTAÇÃO.

Question 26

Os sítios mais populares de STR para uso forense contêm
repetições tetranucleotídicas.

Answer 26

CORRETO

Question 27

A região de DNA contendo o STR é amplificada pela PCR
(reação em cadeia pela polimerase), usando iniciadores que
são complementares para uma única (não repetitiva)
sequência flaqueando as repetições.

Answer 27

CORRETO

Question 28

As sequências mais longas de DNA apresentam um
grande grau de polimorfismo de comprimento na
população humana.

Answer 28

ERRADO, NÃO NECESSÁRIAMENTE TERÁ GRANDE GRAU DE POLIMORFISMO.

Question 29

A técnica da PCR ou reação em cadeia de polimerase é um
método que permite analisar todo o genoma de uma célula,
com relação à organização estrutural que se baseia no corte
do DNA em sítios de reconhecimento das enzimas de
restrição.

Answer 29

ERRADO, ESSA TECNCA É RFLP

Question 30

A técnica southern-blot possibilita a análise de uma
região específica do DNA, por meio de amplificação
bioquímica ou molecular de uma sequência alvo, capaz de
gerar um grande número de cópias em ciclos repetidos.

Answer 30

ERRADO, ESSA TÉCNICA É DE PCR

Question 31

Em virtude dos números de polimorfismos existentes nos
seres humanos, cada indivíduo é geneticamente único

Answer 31

ERRADO, TEM OS GÊMEOS UNIVITELINEOS

Question 32

Os processos de identificação por meio do DNA por
técnica de RFLP (Restriction Fragment Length
Polymorphism) substituíram os antigos processos que
utilizavam os STR (Short Tandem Repeats).

Answer 32

ERRADO, STR SUBSTITUIU RFLP

Question 33

Os polimorfismos do tipo RFLP,
utilizados na genética forense, correspondem a

Answer 33

variações de tamanho de fragmentos de restrição.

Question 34

Região de controle do DNA mitocondrial

Answer 34

Nesse região vai ter a região hipervariavel 1 e 2 que é onde vai estar os SNPs

Question 35

DNA tem alta taxa de mutação ?

Answer 35

Correto, exposto a radicais livres , poucos mecanismo de repara, baixa fidelidade a DNA polimerase. Não possui as histonas que protegem .

Question 36

Análise de DNA mitocondrial é realizada por sequenciamento ?

Answer 36

Correto

Question 37

Qual a desvantagem do DNA mitocondrial ?

Answer 37

A heteroplasmia DNA mitocondrial é uma mesma pessoa pode ter DNA mitocondrial mutado e não mutado , o que dificulta a análise.

Question 38

Em caso de mistura de fluidos corporais de ambos os sexos qual é a técnica utilizada ?

Answer 38

Tipagem do cromossomo y pode fornecer o formações específicas sobre componentes masculinos.

Question 39

O que fala a hipótese de LYON?

Answer 39

Ocorre um ajuste de compensação de dose na expressão do cromossomo x nas mulheres, onde um dos cromossomos e inativado nas células somáticas , essa inativação ocorre no período embrionário entre 13 e 16 semanas. Essa inativação ocorre de maneira randômica, uma vezes definido qual x será inativo ele assim fica durante toda vida causando efeito mosaico. Esse x inativado fica aderido a membrana nuclear formando o corpúsculo de barr.

Question 40

Análise de DNA mitocondrial e realizada por sequenciamento ?

Answer 40

Correto. Sequenciamento comparado com amostras do suspeito , apenas 1-2 por cento dos nucleotideos dessas regiões costumam ser diferentes em indivíduos não relacionados.

Question 41

Umas das vantagens do papel FTA e que os resultados podem ser obtidos sem quantificação.

Answer 41

Correto