DNA FORENSE Flashcards
Como funciona o processo de sequenciamento do tipo ilumina ou solexa?
Amplificação por pontes com inserção de adaptadores P5 e P7 , utiliza nucleotídeos marcados , acontece em placas com sucessivas lavagens que após a inserção dos nucleotídeos marcados irá fornecer fluorescência que irá ser detectada e montada a partir de um eletroferograma.
E uma técnica de amplificação com apenas 25 pb que em 4 dias de amplificação pode gerar FRAGMENTOS COM 120 GIGABASES , é muito demorado e uma técnica já ultrapassada.
Como funciona a técnica de sequenciamento SOLID?
-Sequenciamento por ligação PROBES (SONDA).
- Sequenciamento por DNA LIGASE.
PASSOS:
A) Fragmentação - 60 a 90 pb , é usado adaptadores nas extremidades e no meio
B) Ligação dos adaptadores P1 e P2
C) Armazenado em bibliotecas genômicas até serem utilizados.
D) Sequenciamento - PCR por emulsão (microesferas)
E) ligação de adaptadores as microesferas
F) Placa
G) Lavagem com sondas marcadas
* 8 nucleotideos- 3’ fluoróforo
* 7 nucleotideos - 3’ fluoróforo
* 6 nucleotideos - 3’ fluoróforo
H) O sequênciamento se dará por SOBREPOSIÇÃO DAS SONDAS MARCADAS PELO FLUORÓFORO
OBS: NÃO UTILIZA A POLIMERASE ( ENTÃO NÃO É UM SEQUENCIAMENTO POR SÍNTESE), SOMENTE A LIGASE.
O sequenciamento SOLID é um sequenciamneto por sìntese?
ERRADO, é um sequenciamento por sobreposição das sondas marcadas por fluoróforos.
O que é doença monogênica?
São doenças que afetam um único gene , exemplo: Fibrose cística, anemia falciforme e doença de Huntington.
O que é minissatélites (VNTR)?
Sequencia de 6 a 10pares de bases , predominante em regiões não codificantes (TELOMÉRICAS ).
O que é microssatélites (STR)?
Sequência de 1 a 6 ou 10 pares de bases em TANDEM (AGRUPADAS) no qual vai variar o tipo ou a quantidade de repetição. UTILIZADO PARA AMPLIFICAÇÃO . USADO NA TRAGÉDIA DO WORLD TRADE CENTER PARA ENCONTRAR AS VÍTIMAS.
Como ocorre a inativação do X ?
E um processo no qual umas das copias do cromossomo X em fêmeas é inativado. O cromossomo inativado recebe o nome de CORPUSCULO DE BARR e o mecanismo de ação utilizado é o GENE XIST
O que é o STUTTER ou GAGUEJO?
São pequenos picos no eletroferograma que ocorre devido o deslizamento da DNA POLIMERASE que na hora a replicação deixa de colocar algum nucleotídeo.
Quais são as etapas da amplificação por PCR?
- Desnaturação
- Anelamento do primer iniciador
- Extensão
O que é o primer iniciador ?
Par de OLIGONUCLEOTÍDEOS de 8 a 30 pb se anela a uma região do DNA e então inicia na REGIAO 3’ OH LIVRE a complementariedade das bases nitrogenadas para amplificação (REGIAO STR).
Quais são as temperaturas utilizadas para desnaturação na técnica de PCR?
Aos 95° ocorre a separação da dupla fita de DNA.
Aos 52° - 65° ocorre a diminuição da temperatura para o PAREAMENTO DOS INICIADORES.
Aumenta a temperatura para 72° para ocorrer o ALONGAMENTO DA CADEIA
O que é a TAQ POLIMERASE?
Enzima termoestável utilizada para amplificação do DNA através da técnica de PCR.
O que são as enzimas de restrição?
São utilizadas para cortar fragmentos do DNA
O que é sequencoa de bases PALÍNDROMICAS?
É A MESMA COISA SE LER DE TRAS P FRENTE.
O que são os PLAMÍDEOS?
É um tipo de vetor.
Os nucleotídeos que compõem os SNPs (single nucleotide
polymorphisms), ou polimorfismos de nucleotídeo único,
sofrem mutações com menor frequência.
correto
As sequências repetitivas encontradas no genoma, como,
por exemplo, CGG, se ocorrerem em regiões intrônicas, não
causarão prejuízo ao indivíduo e não poderão ser usadas
para identificação pessoal.
ERRADO, PODDE CAUSAR PREJUIZO.
Um padrão intercalado de DNA
consiste de:
blocos alternados de DNA cópia única e DNA
moderadamente repetitivo.
GRANDES DESASTRES QUAL MARCADOR É UTILIZADO?
STRS, DNA MITOCONDRIAL. OS SNPS QUE SÃO MUITO PEQUENOS PODEM SER UTILIZADOS MAS E TECNICA É MAIS ROBUSTA( SEQUENCIAMENTO).
Os polimorfismos de comprimento incluem regiões que se
repetem no DNA genômico e são chamados de
microssatélites (STRs) e minissatélites (VNTRs).
CORRETO
Os polimorfismos de sequência constituem-se de
diferentes nucleotídeos em uma determinada localização no
genoma, sendo que suas variações podem ser manifestadas
como regiões de alelos alternativos, substituições, adições
ou deleções de bases.
CORRETO, OS INDELS SOMENTE POR SEQUENCIAMENTO POR QUE O FRAGMENTO É PEQUENO, ENTÃO É DE SEQUENCIA.
Os VNTRs (do inglês, Variable Number of Tandem
Repeats) são sequências curtas de bases que ocorrem em
números variáveis dentro do grupo de repetições in tandem.
O número de repetições encontradas varia de um local para
outro dentro do genoma e também varia entre indivíduos.
Podendo, assim, ser diferenciados pelo comprimento de
sequência VNTR do DNA
CORRETO
Os STRs (do inglês, Short Tandem Repeats) são
nucleotídeos alinhados, em curtas repetidas, organizados
em sequência. Estes são trechos de DNA constituídos em
unidades repetidas de dois, três ou quatro nucleotídeos e
localizados dentro de regiões de sequência única com
número menor do que 100 pares de nucleotídeos. Cada
região genômica que contém determinado número de
repetições de uma sequência constitui um loco genético,
que varia entre os indivíduos e também é multialélico.
CORRETO
As regiões STR (short tandem repeat) geralmente
apresentam bialelismo
ERRADO, MULTIALELOS
