Défense et contre-défense II : CRISPR/cas Flashcards
Qu’est-ce qu’ un système CRISPR ?
Il s’agit de courtes séquences répétées de 21 à 48 pb séparées par des “spacers” uniques, associés à des gènes cas, qui confère une certaine mémoire infectieuse adaptative.
Qu’est-ce que le proto-spacer.
Le proto-spacer est la séquence correspondant au spacer du CRISPR, mais au sein du phage (avant inclusion).
Qu’est-ce que PAM ?
Protospacer-Associated-Motif. Séquence située en amont de la séquence virale qui sera intégrée au CRISPR en tant que spacer et permettant de différencier les spacer et protospacer.
Quel adjectif qualifie l’expression des gènes CRISPR ?
C’est une expression constitutive.
Quelles sont les trois étapes de CRISPR ?
1) ACQUISITION : Lors de l’entrée d’ADN viral, une séquence est intérgrée en amont des séquences repeat : c’est le spacer.
2) EXPRESSION de l’opéron cas et des séquences répétées sous forme d’ARN précurseur, maturé en précurseur.
3) INTERFERENCE L’ARN précurseur “guide” attaque l’ADN viral par interférence
A quoi sert le cluster de gènes Cas localisé en amont ou aval des répétitions ?
Code pour la machinerie enzymatique nécessaire à l’acquisition et la dégradation des ADN cibles. Comporte entre autres Cas1 et Cas2.
Décrire la structure d’un CRISPR.
Cas-cluster/Leader/Rep/Spacer
Qu’est-ce qui limite, entre autres, le nombre de séquences répétées ?
La recombinaison homologue.
Dans quel CRISPR intervienennt cas1 et 2 et à quoi servent-elles ?
Interviennent dans des CRISPR de type I. Servent à cliver le protospacer et l’amener dans le spacer.
Quelle est la particularité des CRISPR de type III ?
Ils permettent l’immunité pour les virus à ARN, et du coup incluent une étape avec une RT. De plus, pas besoin de PAM.
Pour les CRISPR de type I, qu’est-ce qui est requis pour mettre en place l’interférence ?
IL faut un complexe cascade qui reconnaît la séquence complémentaire à PAM sur le brin apparié avec le CrRNA.
Quel complexe clive l’ADN cible chez les CRISPR de type II ?
Cas9.
