Cytogénétique conventionnelle Flashcards
Niveau de compactage de l’ADN avec son taux de compaction
ADN
Nucléosome - X7
Solénoïde - X42
Boucle - X300
Spire - X3000 et plus
Chromosome - X10 000 au maximum
Quels sont les prérequis à l’obtention des chromosomes ?
- Avoir des cellules en division
- Mise en culture
- Incubation
- Arrêt des cultures
- Choc hypotonique
- Fixation
- Étalement des chromosomes
- Marquages morphologiques
- Examen microscopique, capture d’images
Quels sont les deux catégorie de cellules pouvant servir à l’analyse des chromosomes
En division spontanée et fréquente dans l’organisme
En division spontanée mais lente dans l’organisme
Quels sont les types de culture possible pour l’observation des chromosomes
A. Culture non synchronisée
B. Culture synchronisée
Que permet l’incubation avec plus d’azote
Ressemble plus au milieu intérieur du corps et cause moins de stress pour les cellules.
l’arrêt des cultures se fait dans quel phase ?
la phase M
Que permet l’arrêt des cultures
- Empêche la formation du fuseau mitotique en brisant les microtubules au stade de métaphase (accumulation de cellules).
- Augmente l’index mitotique
- Redresse les chromosomes
- Facilite l’étalement
- Augmente la condensation des chromosomes
utilisation de la colcémide
Que permet le choc hypotonique
Permet un grossissement par osmose de la membrane cellulaire et donne plus d’espace aux chromosomes pour s’étaler
Que permet la fixation des chromosomes
-Assure l’intégrité de la morphologie et stabilise des chromosomes
-Conserve les cellules en dénaturant les protéines et en dissolvant les lipides de la membrane cellulaire
-Permettre aux cellules de coller sur la lame de microscope
-Permettre le gonflement des cellules et l’étirement des chromosomes (hygroscopie)
L’étalement des chromosomes s’effectue grâce à quoi
-L’effet hygroscopique de l’acide acétique (appel d’eau avec suite à l’évaporation du méthanol)
-L’humidité, température et le débit d’air environnant
Qu’est-ce que le marquage morphologique
Procédés chimiques ou enzymatiques permettant de mettre en évidence des structures appelées bandes sur les chromosomes
Que veut dire le marquage GTG
-Colore les bandes G
-Suite à un traitement à la Trypsine
-Et une coloration au Giemsa
-Technique développée en Amérique, maintenant employée presque partout
-Permet de mettre en évidence les bandes G
Quel est le principe du marquage GTG
-Digestion préférentielle des protéines maintenant l’ADN enroulé se trouvant dans les régions moins condensées (bandes R)
-Le colorant Giemsa vient se lier au squelette de phosphate de l’ADN
-Les bandes R sont moins colorées par le Giemsa parce que les protéines digérées rendent l’ADN poreux, il retient moins bien le colorant
-Les bandes G sont fortement colorées car elles sont très peu digérées, donc elles retiennent bien le colorant
Quel est le principe de l’examen microscopique des chromosomes
-Balayage des étalements sur les lames dans le but de repérer un nombre suffisant de métaphases de bonne qualité
-Métaphases sont repérées, capturées et caryotypées
Quels sont les avantages et limitations de l’analyse caryotypique
Avantages : permet de visualiser
-Les remaniements chromosomiques (non équilibrés et équilibrés)
-Un mosaïsme faible
Limitations :
- Dépend de l’expérience du cytogénéticien
- Capacité limite de détection ~ 5 Mb
- Exigeante en termes de temps technique
- Coût de l’analyse ~ 450$
