Culture pure

Question 1

Y a t’il beaucoup de bactérie dans l’environnement?

Answer 1

biodiversité extrêmement élevé.
exemple: microflore humaine ( peau, muqueuse)
buccale (700 espèces microbiennes)
éternuement 10^4 à 10^5 microorg.
intestinale 10^11 microorg. /g
sol = 10^9 microorg. /g
En nature : culture mixte!!!

Question 2

Nomme les 4 méthodes de sélections.

Answer 2

• méthode d’enrichissement
• méthode chimique
• méthode physique
• méthode biologique

Question 3

Décrit moi la méthode d’enrichissement.

Answer 3

But: augmenter la proportion du microorg. d’intérêt

Doit tenir compte: 
1. proportions de l'espèces d'intérêt
2. vitesse de croissance
3. caractéristiques spécifiques
chimiques, physiques et biologiques

Question 4

Décrit moi la méthode chimique

Answer 4

Enrichir le milieu de culture. Nutriments ou source E particulière au microorg.

source de Carbone: cellulose ou CO2
source d’azote: N2

Question 5

Par rapport à la méthode chimique, nomme des substances inhibitrices.

Answer 5

Colorant: violet de cristal, vert brillant ( dim. Gram+)

Alcool phenyléthyline: (dim. Gram -)

Sels biliaire ( agents chaotrophiques)—désoxycholate de Na : sélection de bactéries entériques ( organismes intestinaux) et milieu MacConkey (favorise la croissance de bactéries entériques), ( gram -, lactose +-)

Question 6

Pour ce qui est de la méthode chimique, à t’on des exemples de milieu diluée?

Answer 6

• Caulobacter— eau douce milieu oligotrophe (rare+nourriture) donc milieu pauvre en nutriment.
• Peptones 0,01% vs 2% (autres espèces) nourriture rare mais capacité capture nutriments efficaces donc quantité moins importantes nécessaire dans env.

Question 7

Décrit moi les méthodes physiques.

Answer 7

Traitement à la chaleur 80 deg Cel, 10 min— endospores (seuls org. prod. endospores)

Dessication : 10 jours en présence de dessicant (streptomyces)—élimine l’eau

Temp d’incubation particulière

Taille cellulaire (filtre o,22 u (treponema denticola)

Question 8

décrit moi la méthode biologique.

Answer 8

(par infection expérimentale)

1) pahogénicité
mycobacterium leprae : lépromes (lèpres/incultivable in-vitro)
Bactéries dans le sang (septicémie)
Bactéries dans liquide céphalorachidien

2) Symbiose
Plante-Rhizobium: Nodules

Question 9

De quoi sont inspirés les méthodes de sélections?

Answer 9

inspirées des méthodes de la sélection dans la nature ( basées sur des conditions de section existant naturellement)

Question 10

Définition d’une culture pure.

Answer 10

population de microorg, ou tous les individus ont les mêmes caractéristiques (population homogène).
- Provient de la multiplication d’une ou quelques cellulles identiques (reproduxtion asexuée)

Question 11

Colonie pure = culture pure???

Answer 11

Dépend!

1) si échantillon biodiversité grande ? ( plus c’est grand , plus probabilité qu’il y ait + d’un type de microorg.)
2) Présence biofilm/glycocalyx—absorption de plusieurs cellules (1 seule colonie)
3) plusieurs séquences d’isolement.

Question 12

Quels sont les 3 types d’ensemencements

Answer 12

ensemencement en tries, en surface ou en profondeur. striation sur milieu solide (milieu gélosé)

Question 13

explique la striation

Answer 13

striation sur milieu gélosé :
fil à boucle
série de stries successives -stérilisation du fil entre séries - épuisement quantité des colonies pour isoler colonie spécifique

Question 14

Qu’elles sont les limites de la striation sur milieu gelosé?

Answer 14

si proportion diminue de lespece alors, perte de l’échantillon désirée ( non visible)

Question 15

Dilution séquentielle en milieu liquide suivies d’un étalement

Answer 15

1) dilution
2) en surface du milieu ((à l’aide d’une tige plastique stérile) croissance sur la surface)
En profondeur ( gélose de surface, dépend différente concentration d’agar (45 deg Cel)— répartition avec la gélose (form. gélose de surface)

uniformisation afin d’atteindre un milieu dilué (croissance en profondeur)

colonies envahissantes (cell. emprisonnées dans agar) Met en surface afin de limiter impacts.)

Question 16

limites de la dilution

Answer 16

proportion diminuer espèce d’intérêt, bact. thermosensibles ( gélose de surface 45 deg Cel)

Avantages: quantif.

Question 17

Nomme les organismes de référence pour les souches-types

Answer 17

American Type Culture Collection
National Collection of Type Culture (UK)
Japan collection of organisms

Question 18

Caractères culturaux

Answer 18

Milieu solide

• Caractérisitque coloniales (même milieu/colonies isolées/Diff.-contamination ou mutants?)
• Taille
• Marge (bord, surface, dentelé, filamenteuse, lobée)
• Élévation (plate, convexe, bombée)
• Texture (Mucoide (contient muccus), sèche, cassante)
• Caractéristique optiques (opaque, transclucide, transparent)
• Pigmentation (typique culture +Temp)—distinguer une colonie diffusion—-pigment hydrophile.
• Autres (hémolyse gélose sang) (fluorescent phosphorescent)

Milieu liquide

• Quantité de croissance cellulaire
• Distribution
• Texture

Question 19

De nos jours , retour étude cultures mixtes
technique à la base de la microbiologie.

Donne un exemple d’oublis de ces techniques.

Answer 19

confusion E.coli/ S.cerevisiae

pigment vert d’e.coli.

colonie ne veut pas dire culture pure savoir pourquoi;)

Question 20

Décrit brièvement ce qu’est un biofilm.

Answer 20

Forme de croissance ubiquitaire dans les environnement aqueux.
Les biofilms sont composés de populations microbiennes enrobées d’une matrice de polymères extracellulaires où les cellules adhèrent les une aux autres ou à une surface/interface.
Présence de plusieurs microorg.
Très ancienne (stromatolithes—forme de vie prédominante datant de 3,5x10^09 à 5x10^6 ans)

Question 21

Décrit les surfaces des biofilms.

Answer 21

inorganiques (minerais, métal, plastiques,etc)

organiques (vivants ou morts)

Flocs (agrégats microbiens)—macro-colonies libres en suspension donc pas attachés `des surfaces)

Question 22

Qu’elles sont les avantages pour les bactéries d’avoir des matrices dans biofilms.

Answer 22

1) accès plus grand aux nutriments
2) création d’un microenv.
3) favorise croissance

Question 23

différence entre les cellules plantoniennes et les cellules en biofilms (sessiles) attaché/fixé à biofilm?

Answer 23

planctoniques: unicellulaire

Sessiles: pluricellulaire
-échanges nutriment, signaux mol (senseurs de masse critique :quorumsensing)

*devient comme une cellule dans un groupe (comme pluricellulaire

Question 24

Quelles sont les 5 étapes de la formation d’un biofilm?

Answer 24

1) attachement à une surface
2) Stabilisation de l’attachement
3) Formation de micro-colonies
4) Maturation du biofilm
5) Essaimage

Question 25

Décrit l’étape de l’attachement à une surface lors de la formation d’un biofilm.

Answer 25

(en grandes partie formé de polysaccharides)

• réversible
• irréversible
• surfaces
• Rugosité, micro-courant, nature de la surface: charges, hydrophobicité (plastiques) — (comp.hydrophobe grande efficacité)
• Cellules (fav. attachement) gycocalyx, fimbriae, adhésines, flagelles.

Question 26

Décrit l’étape de la stabilisation de l’attachement lors de la formation d’un biofilm.

Answer 26

• formation de monocouche

- interactions (cellules-cellules ) (cellules-surface (ancrage))

Question 27

Décrit l’étape de formation de micro-colonies lors de la formation de biofilm.

Answer 27

-3-s couches de cell. (formation de la matrice)

Question 28

Décrit l’étape de la maturation du biofilm lors de la formation du biofilm.

Answer 28

Architecture complexe et hétérogène.
colonnes, canaux
-diffusion nutriments, déchets
-cellule— différent états physiologiques (position dans biofilm)
-dépend de taille: nutriment, espèces, conditions
(15-150 u à plusieurs mm)

Question 29

Décrit l’étape de l’essaimage lors de la formation du biofilm.

Answer 29

-dispersion
L’un ou l’autre: érosion/abrasion: bris mécanique ou Mue: processus biologique (essaimeurs(production)— cellules planctoniques) pour une partie du biofilm * retourne à l’étape 1
-colonisation d’autres milieux.

Question 30

Conséquences de la présence de biofilms?

Answer 30

Protection de la cellule bactérienne

(système immunitaire -antibiotique aug (10^4x) donc concentration plus grande pour éliminer biofilm (difficulté à diffuser au centre du biofilm)
Peut entrainer (microorg. sous forme de biofilm):
- pseudonomas aeruginosa-fibrose kystique
- Maladies paradontales
- infections d’implants/ prothèses /cathéters
-lentilles cornéennes

Industrielles

dim. débit des liquides (Aqueduc, (eau potable), Oléoducs (pétrole)
aug. corrosion des structures (conduites d’eau galvanisées (Zn), plateformes pétrolières)
Utilisation de biocides

Question 31

Peut-on inhiber la formation de biofilm donne un exemple.

Answer 31

Oui .

Delisea Pulchra n’a pas de biofilm dessus!
—entraine inhibition de quorum sensing quie st toxique chez les mammifères (senseur de masse critique)

Question 32

Qu’est-ce que la compagnie CIBA a réalisé?

Answer 32

protection des structure immergées en inhibant la formation du biofilm. pour marine militaire améraicaine qui sauverait 10^9 M $
polysaccharide de capsules / recouvre les surfaces-promotteur, mais biodégradable.

Question 33

Pourquoi faut-il comprendre les biofilms?

Answer 33

mieux les contrôler

élimination possible? potentiellement le cas, mais de façon temporaire