CRISPR-Cas9

Question 1

À quoi sert la méthode CRISPR-Cas9

Answer 1

Modifier le génome de manière ciblée afin de corriger une mutation ou de désactiver un gène par exemple. Bien qu’elle puisse poser des problèmes éthiques, cette méthode est notamment utilisée dans les domaines de la santé, et dans d’autres domaines d’application des biotechnologies

Question 2

Les étapes de la méthode CRISPR-Cas9

Answer 2

1. Identification de la séquence cible: une séquence spécifique d’ADN à modifier est identifiée dans le génome
2. Conception de l’ARN guide (ARNg): un ARN guide est conçu pour être complémentaire à la séquence d’ADN cible. L’ARN g dirigera l’enzyme Cas9 vers l’emplacement précis à modifier dans le génome
3. Formation du complexe CRISPR-Cas9: L’ARNg se lie à l’enzyme Cas9 (hydrolase) pour former le complexe capable de cibler et couper l’ADN
4. Introduction du complexe CRISPR-Cas9 dans la cellule: Le complexe ARNg-enzyme Cas9 est introduit dans la cellule (par le biais de plasmide ou virus…)
5. Recherche et reconnaissance de la séquence cible: une fois dans la cellule, ARNg dirige Cas9 vers la séquence cible dans le génome. La reconnaissance se fait par la complémentarité entre l’ARNg et l’ADN cible
6. Clivage de l’ADN: L’enzyme Cas9 coupe les deux brins de l’ADN à l’emplacement déterminé par l’ARNg, ce qui crée une cassure double brin de l’ADN
7. Réparation de l’ADN: la cellule détecte la cassure double-brin et tente de la réparer à l’aide de mécanismes naturels:

Non-homologus end joining (NHEJ): reparation rapide mais souvent imparfaite entraînant des insertions ou des deletions au site de la cassure (mutation)

Homology-directed repair (HDR): reparation plus précise de la cassure à l’ide d’un modèle ADN fourni

8. Modification génétique: En utilisant ces mécanismes on peut insérer une nouvelle séquence d’ADN, supprimer une partie de la séquence ou remplacer une séquence spécifique
9. Validation des modifications: apres la réparation, la séquence modifiée est vérifiée afin d’assurer le succès de la modif. La cellule se met à fonctionner en fonction de la modif subie