Cours 7-regulation exp eucaryote Flashcards
Les activateurs transcriptionnels ont une
structure modulaire: (2 domaines)
- Domaine de fixation à l’ADN
- Domaine d’activation de la transcription
Quelle est la particularité de la machinerie transcriptionnelle chez les eucaryotes ?
Elle est plus complexe que chez les procaryotes et nécessite des facteurs généraux de transcription pour recruter l’ARN Pol II.
Pourquoi les activateurs transcriptionnels sont-ils nécessaires ?
Ils permettent l’expression des gènes en ouvrant la chromatine et en interagissant avec des séquences régulatrices.
Quelles sont les deux parties principales d’un activateur transcriptionnel ?
Le domaine de fixation à l’ADN (DBD) et le domaine d’activation de la transcription (AD).
Que signifie ‘UAS’ dans le contexte de Gal4 ?
Upstream Activating Sequence, une séquence activatrice située en amont des gènes cibles.
Quels sont les gènes impliqués dans la voie d’utilisation du galactose chez S. cerevisiae ?
Les gènes gal1, gal2, gal7, gal10, entre autres.
Quel est le rôle principal de Gal4 ?
C’est un activateur transcriptionnel qui se fixe sur l’UAS pour activer l’expression des gènes gal en présence de galactose.
Que se passe-t-il dans un mutant gal4 ?
Les gènes gal ne sont pas induits, même en présence de galactose.
Comment teste-t-on si Gal4 se fixe à l’ADN ?
Par des expériences comme le retard sur gel (EMSA) ou l’empreinte à la DNase.
Où Gal4 se fixe-t-il sur l’ADN ?
En 5’ des gènes cibles comme gal1, gal2, gal7 et gal10.
Combien d’UAS sont présentes pour les différents gènes gal ?
Par exemple, 4 UAS pour gal1 et gal10, 3 UAS pour gal7, et 2 UAS pour gal2.
Qu’est-ce que l’expérience EMSA permet de démontrer ?
La formation d’un complexe ADN-protéine grâce au retard de migration sur gel.
Quel est l’objectif d’une empreinte à la DNase ?
Identifier les sites spécifiques où une protéine se lie à l’ADN.
Comment tester l’activité transcriptionnelle de Gal4 in vivo ?
Que se passera-t-il si Gal4 est un activateur transcriptionel? Comment seraient les colonies?
En utilisant une construction:
UAS (gal), TATA box puis gène rapporteur comme LacZ qui produit une enzyme visible (β-galactosidase).
Si Gal4 est un transcriptionnel,
- se fixera à l’UAS
–>activera le gène rapporteur LacZ
=> l’enzyme β-galactosidase sera produite et en
présence de X-Gal les colonies seront bleues
Que montre une colonie bleue dans un test avec X-Gal ?
La production de β-galactosidase, indiquant que Gal4 a activé le gène rapporteur.
Pourquoi créer des mutants de Gal4 avec des délétions progressives ?
Pour identifier les régions fonctionnelles comme le DBD et l’AD.
Où se trouve le domaine de fixation à l’ADN (DBD) dans Gal4 ?
Dans la région N-terminale.
Où se trouve le domaine d’activation (AD) dans Gal4 ?
Dans la région C-terminale.
Que se passe-t-il si le domaine AD est supprimé ?
L’activité transcriptionnelle diminue fortement, mais la fixation à l’ADN reste possible.
Que démontre la modularité des activateurs transcriptionnels comme Gal4 ?
Les fonctions DBD et AD peuvent être séparées expérimentalement.
Pourquoi dit-on que Gal4 est un activateur transcriptionnel modulaire ?
Parce qu’il possède des domaines distincts pour la fixation à l’ADN et pour l’activation de la transcription.
Quel est le rôle principal du répresseur Gal80 ?
Il interagit avec Gal4 pour inhiber son activité en absence de galactose.
Comment Gal80 est-il levé en présence de galactose ?
Par interaction avec Gal3, qui dissocie Gal80 de Gal4 grâce au galactose et à l’ATP.
Que montre une mutation hypermorphe dans GAL80 ?
Une répression accrue des gènes cibles, même en présence de galactose.
Quelle est la conséquence d’une mutation dans GAL3 ?
L’incapacité à lever la répression exercée par Gal80 sur Gal4.
Pourquoi Gal80 n’interagit-il pas directement avec l’ADN ?
Il agit uniquement via son interaction avec Gal4 déjà fixé sur l’UAS.
Quelle enzyme est utilisée dans les tests fonctionnels avec X-Gal ?
La β-galactosidase.
Pourquoi utiliser un substrat comme X-Gal dans ces expériences ?
Pour visualiser facilement l’activité enzymatique par un changement de couleur (bleu).
Que démontre un test fonctionnel avec deux plasmides différents chez ΔGal4 ?
L’importance des domaines DBD et AD pour activer la transcription.
Comment peut-on caractériser une séquence consensus liée par une protéine comme Gal4 ?
Par analyse des zones protégées lors d’une empreinte à la DNase.
Pourquoi étudier des mutants partiels de Gal4 est-il utile ?
Pour comprendre quelles régions sont essentielles à sa fonction d’activation ou de liaison à l’ADN.
