cours#2

Question 1

Endonucléases de restriction: Pourquoi l’enzyme ne dégrade pas le génome de l’organisme qui
exprime cette enzyme ?

Answer 1

• Il est protégé par des méthylases qui méthyle une base du site de
  reconnaissance empêchant ainsi l’enzyme de fonctionner et donc
  de dégrader son propre ADN.
• Par contre un ADN étranger qui ne
  serait pas modifié est dégradé.
  =>première ligne de défense des organismes pour éviter l’invasion par de l’ADN étranger.

Question 2

Lors d’une électrophorèse en gel d’agarose, de quel pôle vers quel pôle va migrer l’ADN? Quelle coloration se fait pour visualiser les bandes d’ADN?

Answer 2

-l’ADN va du - vers le +
-coloration au bromure d’éthidium (fluoresce rouge 20 fois plus intense lorsqu’il s’intercale entre les paires de bases.)

Question 3

Qu’est-ce qu’un système de restriction?

Answer 3

Système de restric-on = Enzyme + méthylase associée

Question 4

Hydrolyse du squelette “sucre-phosphate” : les _______1.
Même coupure sur l’autre brin,
le _______2 du lien phosphodiester reste toujours sur l’extrémité 5’, générant des fragments de restriction 5’P et _____3. Les acides nucléiques sont des composés __________4 chargés (-), lors de l’électrophorèse en gel d’agarose ils migrent vers le +

Answer 4

1. nucléases
   2.phosphate
2. 3’OH.
3. uniformément

Question 5

Comment reconnaître spécifiquement un fragment d’ADN au sein d’une population hétérogène de fragments ?

Answer 5

Deux étapes:
- Création d’une sonde radioac>ve ou fluorescente
- Hydridation de la sonde sur l’ADN d’intérêt
-Southern Blot

Question 6

Qu’est-ce que la PCR?

Answer 6

C’est une technique d’amplification génique

Question 7

De quoi a-t-on besoin pour faire une PCR?

Answer 7

1. ADN double brin
2. Amorces d’ADN définies
3. Polymérase thermophile Taq
4. 4 dNTP
5. Tampon (Mg2+)

Question 8

Quelles sont les étapes pour faire une PCR?

Answer 8

1. dénaturation: 94 degrés
2. hybridation des amorces: 35-55 degrés
3. polymérisation: 68-72C
4. cycles succesifs …

Question 9

Comment calculer la température d’hybridation?

Answer 9

Tm=2(A+T)+ 4(G+C)
On prend la valeur la plus baise–>on luis soustrait 4 degrés

Question 10

De quoi a-t-on besoin pour faire une PCR?

Answer 10

-ADN matrice
-Amorces d’ADN définies
-Polymérase thermophile
-4 dNTP
-Tampon (Mg2+)