Cours 5: Manipulation de l'ADN

Question 1

enzyme de restriction

Answer 1

endonucléases
permettent de couper de l’adn étranger
reconnaissent des sites de 4 à 8 nucléotides en palimdromes
coupneent toujours au même endroit et de la même façon

Question 2

Coupe franche

Answer 2

coupe droite

Question 3

Coupe cohésive

Answer 3

présence d’ADN simple brin
produisent des extrémités libres inter compatibles

Question 4

Clonage dans les vecteurs

Answer 4

Se sont des plasmides, doivent avoir:
- origine de réplication
- marqueur de sélection
- site de multiclonage (espace d’insertion)

Question 5

Séquençage

Answer 5

A l’aide d’une polymérase et d’une amorce, on peut synthétiser un brin par rapport à un autre brin.

Ajoute des nucléotides dNTP (avec OH en 3’)
Et en certaine concentration du ddNTP (Sans OH en 3’) qui arretent donc la synthèse

Par électrophorèse, on trie des brins synthétisés par taille et on regarde quelle est la dernière lettre. Par chevauchement on connait alors la séquence.
Pour les séquenceurs automatiques, les ddNTP sont fluorescents, un laser les visent et un détecteur de longueur d’onde détecte la longueur d’onde spécifique à une lettre .

Question 6

PCR polymerisation chain reaction

Answer 6

production d’une grande quatitée de copies par amplification d’une séquence
repose sur une polymérase résistante aux hautes températures: Taq polymérase et le thermocycleur

Question 7

Principe du PCR

Answer 7

3 phases qui sont répétées plusieurs fois
- Dénaturation
- Hybridation
- Élongation

Séquence entre les deux amorces et amplifié, cad multiplié par 2 a chaque cycle