Cours #2

Question 1

Stabilité des acides nucléiques:
°Contaminants (2)
°Précautions (2)

Answer 1

°DNAses et RNAses
°Manipulation à 4°C et gants de nitrile

Question 2

3 étapes de purification

Answer 2

°Lavage
°Lyse cellulaire
°Extraction de l’ADN

Question 3

Lavage:
°Pk?
°Produit chimique

Answer 3

°Retirer milieu extracellulaire
°Tampon isotonique

Question 4

Lyse cellulaire: 2 types

Answer 4

°Douce: Lyse membrane cellulaire mais pas noyau
°Robuste: Lyse tous les membranes

Question 5

Extraction (3 étapes)

Answer 5

°Ajout phénol/chloroforme
°Agitation
°Précipitation

Question 6

Phénol/chloroforme (3)

Answer 6

°Dissout membrane
°Dénature protéines
°Chloroforme enlève phénol de la phase aqueuse

Question 7

Précipitation: (3)

Answer 7

°Centrifugation (brise ADN)
°Lavage avec éthanol
°Séchage

Question 8

Précipitation de l’ARN (2)

Answer 8

°Utilisation d’agents chaotropiques (dénature prots et prévenir RNAses)
°Utilisation DNAses

Question 9

Comment garder seulement ARNm?
°Eucaryotes
°Procaryotes

Answer 9

°Billes couplés oligo-dT (queue poly A se colle)
°Billes d’hybridation soustractive qui s’‘hybrident avec les ARNr, on garde ce qui colle pas

Question 10

Électrophorèse de l’ADN (4)

Answer 10

°Linéarise ARN, mais dénature pas ADN
°ADN migre selon charge (vers +) et poids
°Plus léger = plus bas
°Contient agarose et poly-acrylamide

Question 11

Comment isolé très gros fragments?

Answer 11

Électrophorèse à champs pulsés (plusieurs courants latérals)