Cours 16 Flashcards
Comment les lymphocytes B naifs peuvent reconnaitre Ag de forme native (vaccin à ARNm)
ARNm va être traduit en protéine du pathogène qui va être présenté par TH1 et migre dans le centre germinatif pour interagir avec Cell B naif
C’est quoi un Ac polyclonal
Reconnait plusieurs épitopes à la surface, non-spécifique et peut avoir une réaction croisée
C’est quoi un Ac monoclonal
un seul Ac qui reconnait un épitope spécifique
Comment les Ac monoclonaux sont produits en recherche (6 étapes)
1) animal immunisé avec Ag
2) récuperation des splénocytes
3) fusion du splénocyte avec cellule immortelle myélomateuse
4) sélection des clones avec spécificité pour l’Ag voulu
5) culture cellulaire du clone produit des Ac
6) purification des Ac par hybridomes
Avantages pour Ac monoclonaux
Avantage: grande spécifité et grande production. Réduit non-spécificité et réactions croisés
Avantages pour Ac polyclonaux
avantage: faible cout, facile et rapide à produire, moins sensibles aux changements d’Ag, utile quand nature d’Ag inconnue
C’est quoi le principe d’ELISA
méthode pour quantifier expression d’une protéine
Étapes du fonctionnement de l’ELISA (5)
1) échantillon fixé dans puit
2) ajout d’Ac conjugé avec enzyme
3) lavage
4) ajout de substrat qui réagit avec enzyme
5) résultats quantitatifs
4 Étapes du Western blot
1) dissociation de l’Ag dans SDS
2) particules de l’Ag inserés dans gel à électrophorèse
3) gel transféré à une membrane et incubé avec antisérum
4)détection des Ac fixés avec anti-IgG couplé à une enzyme
2 utilités pour le western blot
1) permet d’avoir info sur la taille et nombre de protéines du pathogène
2) permet de voir si le patient a des Ac contre les protéines du pathogène
C’est quoi le but de la cytométrie en flux
permet d’obtenir un profil complet des cellules sanguines
Comment la cytométrie en flux fonctionne
les cellules sont marqués par les Ac fluorescent et passent par un flux de laser
