Corynébactéries Flashcards
Quel est le premier acide aminé à voir été fermenté? Par quel m.o.?
Glutamate/ acide L-glutamique
Par Corynebacterium glutamicum
Gram?
+
Catalase?
+
Uréase
+
Sporulante?
non
Motile?
non
pH?
entre 6 et 8.5
Température?
10 à 40, pas plus
Division cellulaire?
Par cassure
Comment fonctionne la division par cassure?
Les cellules restent attachées après la scission binaire. La cassure aboutit en une disposition angulaire des cellules.
Qu’est-ce que les granules de volutine?
Réserve de polyphosphastes inorganiques.
Sources de carbone utilisés?
glucose, fructose, mannose, maltose, sucrose et tréhalose.
Quel milieu sélectif?
Cystéine-Tellurite (colonies noires)
Qu’est-ce qui distingue corynébactéries des corynéformes?
Les corynébactéries sont des corynéformes, mais pas tous les corynéformes sont des corynébactéries.
Nommer les genres principaux de corynéformes.
Microbacterium
Arthrobacter
Brevibacterium
Propionibacterium
Bifidobacterium
Quels sont les étapes pour produire des mutants surproduction d’acide aminé?
- Utiliser un mutagène pour induire la mutation désirée.
- Isoler les bactéries mutantes.
- Cartographier sur le chromosome bactérien le site de la mutation
Quel mutant on préfère? Délétion ou ponctuel?
Délétion pcq pas réversible et pas de leaky
Quels sont les principaux mutagènes utilisés?
NTG, EMS, acide nitreux
Quel est le défi avec le NTG?
Plusieurs mutations à la fois
Quels sont les 2 types de sélection des bactéries mutantes?
Direct et indirecte
Qu’est-ce que la sélection directe?
On met les mutants sur un milieu qui contient un analogue de la molécule qu’on veut produire.
Ceux qui poussent sont ceux qui ont une mutation dans le feedback négatif, ce qui fait qu’ils n’ont plus de rétroinhibition ou ils y sont plus résistants. Ou encore, l’analogue a moins d’effet allostérique (répression).
Quel est le défi avec la sélection directe?
Trouver la concentration optimale de l’agent de sélection
à quoi sert la sélection indirecte?
Comprendre la voie de biosynthèse (cartographier)
Détection des mutants auxotrophes
QU’est-ce que la sélection indirecte?
On recherche des auxotrophes pour l’a.a. d’intérêt.
On fait pousser les mutants sur un milieu complet.
On les réplique sur un milieu qui ne possède pas l’a.a.
Ceux qui n’y pousse pas sont ceux qui ont la voie de biosynthèse défaillante.
Quelles sont les stratégies pour obtenir des mutants suproducteurs d’a.a. (les buts visés)?
-Élimination génétique des mécanismes de rétroinhibition
-Direction altérée des voies métaboliques
-Augmentation de la concentration d’un substrat pour un enzyme en compétition avec les effecteurs de rétroinhibition
-Diminution de la concentration d’un effecteur ou d’un produit final
-Favoriser l’assimilation des précurseurs
-Inhibition ou inactivation des enzymes de dégradation des a.a. produits
Quel m.o. est majoritairement responsable de la production d’acide L-glutamique?
Corynebacterium glutamicum
Source de carbone pour produire acide L-Glutamique?
Mélasse et hydrolase d’amidon
Glucose, fructose, ribose, maltose, xylose
Source d’azote pour produire acide L-Glutamique?
Sels d’ammonium (NH4Cl, NH4SO3)
Urée
Ammoniaque gazeux
En plus d’être une source d’azote, en quoi est utile l’ammoniaque gazeux?
Permet de maintenir le pH pcq la production d’acide L-Glutamique cause une baisse de pH.
Sans ammonium gazeux en aérobie, le pH diminue. Quel problème cela cause?
L’acide alpha-cétoglutarique est accumulé au lieu de l’acide L-Glutamique