Como se estudian Flashcards
Como se llama el compuesto acuoso resultante de romper las celulas?
Homogeneizado o extracto celular
El abordaje convencional implica purificar la proteina atraves de una serie de pasos de …
Cromatografia
Cuales son las propiedades de la proteina en las que nos basamos para separar sus componentes?
- Tamano
- Forma
- Carga Electrica
Forma mas eficiente de cromatografia
cromatografia de afinidad
Como funciona la cromatografia de afinidad?
Separa los polipeptidos en funcion a su capacidad de unirse a una molecula particular
Se carga una mezcla de proteinas sobre un gel de polimero y se la somete a un campo electrico
Electroforesis
segun que propiedades de la proteina separa la electroforesis?
Tamano y carga
V o F
Se puede efectuar una resolucion adicional mediante electroforesis en gen TRIDIMENSIONAL
F
BIDIMENSIONAL
Hace cuantos años fueron desarrolladas la cromatografia y la electroforesis?
hace mas de 70 años
Respecto a la cromatografia de afinidad:
las proteinas unidas a otra proteina X pueden liberarse mediante…?
Modificacion de su ph o de la composicion ionica
Que es lo que escinde la enzima tripsina?
Cadenas polipeptidicas en el lado carboxilo de una lisina o arginina
Como fue secuenciada la hormona insulina?
Usando una proteasa selectiva
En que año fue secuenciada la hormona insulina?
1955
Como se calcula la espectrometria de masas?
se mide la masa exacta y se la identifica segun las proteinas que codifica el genoma, se aplica el codigo genetico
Que significa ionizar?
Adquirir carga electrica
Espectrometria:
Que pasa con los peptidos derivados derivados de la digestión con tripsina ?
Los hacen explotar con un laser
Que es la espectrometria de masas en tandem?
Después de ma Espectrometria se vulebe a repetir el mismo proceso para volver los fragmentos más pequeños
V o F
La mayoria de catalizadores sintéticos son IGUAL de eficaces como las enzimas naturales
F, los catalizadores sinteticos no son igual de eficaces
Con cuanta información estructural contamos?
Casi 3/4 partes de información de las proteinas archivadas en la base de datos
V o F
Mas de 2/3 de todas la proteínas bien estudiadas contienen 1 solo dominio
V
Como de llama el proceso donde se rompe la membrana plasmatica de las células?
Homogeneización
4 maneras de romper la membrana
- Ultrasonido
- Detergente
- Presión
- Émbolo
2 resultados de la homogeneización
Sobrenante y sedimento
Que es el sobrenante?
Componentes más pequeños y menos densos
Que es el sedimento?
Componentes mas grandes y mas densos
Las centrifugas actuales rotan a velocidades de hasta …?
100 000 revoluciones por minuto
La centifrugacion genera fuerzas de hasta…?
600 000 veces la fuerza de gravedad
Que pasa si usamos un rotor de ángulo fijo en vez de uno de brazo oscilante?
El sedimento se forma de manera menos uniforme
Centrifugacion diferencial:
¿Que contiene el sedimento 1?
- celulas enteras
- Nucleos
- Citoesqueleto
Centrifugacion diferencial:
¿Que contiene el sedimento 2?
- mitocondrias
- Lisosomas
- Peroxisomas
Centrifugacion diferencial:
¿Que contiene el sedimento 3?
- Fragmentos cerrados de reticulo endoplasmatico
- otras vesiculas pequeñas
Centrifugacion diferencial:
¿Que contiene el sedimento 4?
- Ribosomas
- Virus
- Macromoléculas grandes
Sobre que base, la centrifugacion separa los componentes celulares?
Tamaño y densidad
Vo F
Los componentes más grandes y mas densos experimentan mayor fuerza centrifuga y son los que se mueven con gran rapidez
V
Cual es el gradiente de sacarosa en la sedimentación de velocidad?
5 - 20%
Cual es el gradiente de sacarosa en la sedimentación de equilibrio?
20 - 70%
Cual es la función de la sacarosa?
Estabilizar los componentes sedimentados y que se aumente su concentración al fondo
Sedimentacion de velocidad:
De que lado a que lado se recogen las fracciones sedimentadas?
De izquierda a derecha
V o F
La sedimentación de equilibrio SOLO USA SACAROSA
F
Tambien usa cloruro se cesio
Sobre que base separa la sedimentación de equilibrio?
Densidad de flotación
Sacarosa en cloruro de cesio:
Con cual podemos formar gradientes mas densos?
Cloruro de cesio
Con que separamos acidos nucleicos? (ADN Y ARN)
Cloruro de cesio
Cromatografia en columna:
Las proteínas pueden ser separadas por su…
- Carga
- hidrofobia
- Tamaño
- capacidad de union a grupos químicos
3 clases de cromarografia
- de intercambio ionico
- de filtración en gel
- de afinidad
La purificación final es de hasta…
10 000 veces
En la cromatografia de afinidad:
Como pueden ser liberadas las proteínas de las microesferas?
Mediante un cambio de ph o soluciones salinas concentradas
En que cromatografia se usan esferas porosas?
De filtracion en gel
Cromatografia de cambio ionico:
De que depende la asociación entre una proteina y la matriz?
Depende del ph y la concentración ionica de la proteína
Que reductor se utiliza en la electroforesis para romper las uniones S-S dentro de las proteinas o entre ellas?
Mercaptoetanol
En relacion a que propiedades se usa la electroforesis para separar proteinas?
Tamaño y carga
Que gel se utiliza en la electroforesis?
Poliacrilamida con SDS
Que toma en cuenta el enfoque isoelectrico? (Propiedad de la prot)
Ph
El enfoque isoelectrico usa la carga neta?
No🤝
Que toma en cuenta la electroforesis bidimensional? (propiedades de la prot.)
Ph y carga eléctrica
Cuántas proteínas aprox. se resuelven en la electroforesis bidimensional?
Mas de 1000 proteínas
1er y 2do paso de la electroforesis bidimensional
- Separan prot según el enfoque isoelectrico
- Se las somete a SDS PAGE
Desde que década la cristalografia de rayos X fue un patron de referencia para determinar la estructura de las proteínas?
1930
Cual es la longitud de onda de los rayos x?
Aproximadamente igual al diámetro de un atomo de hidrógeno
Cuantos aa tiene el Rubisco?
450 aa
Otro nombre de la enzima Rubisco
Ribulosa bifosfato carboxilasa
Función de la enzima Rubisco
Desempeña un papel central en la fijación de CO2 durante la fotosintesis
Para que sirve que se cristalicen las proteinas con respecto a los rayos X?
Dispersan los rayos X para reforzar o anular entre si
De cuantos daltons tiene una proteína pequeña?
50 000 daltons o menos
Como es el núcleo de los átomos en la espectrometria de RM?
El nucleo es intrinsicamente magnetico
Cuantos aminoácidos de longitud tiene la celulosa?
36 aa
Espectrometria de RM:
Que pasa con las proteínas de mas de 50000 daltons?
Pueden romperse en sus dominios funcionales
Espectrometria de RM
Que pasa cuando la solución proteica es bombardeada con explosiones de ondas de radio?
Los núcleos excitados se bambolearan alrededor de sus ejes magnéticos y cuando se alinean (se calman) emiten una señal que revela sus posiciones
V O F
1. Espectrometria de RM:
Sus núcleos actuaran como pequeños imanes y se alinearan con el campo magnetico
V
En está técnica se utiliza una gotita de la proteína pura y se usa el etanol liquido a -180°C congelándolo
Criomioscopia electrónica
V o F
Criomioscopia electronica:
La congelación rápida garantiza que las moléculas circundantes FORMEN cristales de hielo.
F, para que formen cristales de hielo
Criomicroscopia electronica:
Por que es importante que solo unos pocos electrones atraviesen cada parte del especimen?
Para que se desplieguen detectores para capturar CADA electron que atraviesa el especimen
Que clase de imagen te da la criomicroscopia electrónica?
- Bidimensional
- Tridimencional
- unimensional
Bidimensional y tridimensional
Críomicroscopia electrónica:
El ribosoma se mostró en una resolución de…?
0,25 nm
Los avances implican que ahora podemos obtener estructuras de complejos macromoleculares con resoluciones de…?
0,2 a 0,3 nm
Cual es el atomo mas magnetico?
Hidrogeno
