Clonage Flashcards
Qu’est-ce que le génotype?
L’ensemble des gènes qui concertent le développement d’un attribut observé chez un système biologique.
Qu’est-ce que le phénotype?
Un attribut/trait observable chez un système biologique.
Qu’est-ce que l’expression homologue?
Implique la surexpression d’un gène chez un organisme qui le possède naturellement. On copie un gène déjà présent. Cela fait en sorte qu’il y a 2 copies au lieu d’une et cela fait plus de protéines. C’est donc un gène endogène qui est surexprimé.
Cela se fait via une manipulation génétique qui a pour but d’induire une forte transcription du gène cible qui résulte à une haute quantité de ARNm qui, en se traduisant, résulte à une haute production de la protéine traduite.
Qu’est-ce que l’expression hétérologue?
C’est la surexpression d’un gène chez un organisme qui NE le possède PAS naturellement. C’est donc un gène exogène qui s’exprime.
Cela se fait via une manipulation génétique qui a pour but d’induire une forte transcription du gène cible qui résulte à une haute quantité de ARNm qui, en se traduisant, résulte à une haute production de la protéine traduite.
Quels sont les 3 principaux avantages de manipuler la nature pour générer et/ou amplifier des biomolécules d’intérêt?
Moins coûteuse, plus écologique, plus saine.
Qu’est-ce que la biotechnologie?
C’est toute application technologique utilisant des systèmes biologiques pour fabriquer ou modifier des phénotypes à usage spécifique.
Qu’est-ce que le clonage?
C’est la production délibérée d’une copie génétiquement identique d’un gene (clonage moléculaire/génétique), d’une cellule, d’une plante ou d’un animal (clonage reproductif).
Quelles sont des applications du clonage moléculaire?
- Pour étudier les fonctions des gènes.
- Pour reproduire un phénotype intéressant codé par ces gènes (ex. une protéine comme l’insuline ; génie génétique)
- Pour générer même un nouveaux phénotype (Biologie synthétique). Ex. des nouvelles molécules et métablolites.
Expliquez la méthode de clonage par des enzymes de restriction (clonage conventionnel).
On digère un plasmide par des enzymes de restriction. On fait migrer sur gel. On découpe la bande contenant le plasmide manquant un frangent qui a été coupé par enzyme de restriction. On purifie par chromatographie pour garder seulement l’ADN et éliminer le reste d’agarose. On ajoute l’insert (Gène à cloner) Digéré par EcoRI/HindIII Généré par PCR. L’insert se lie à l’ADN avec ligases. On obtient l’ADN recombinant.
Quels sont les avantages du clonage moléculaire?
C’est une méthode peu coûteuse qui présente de nombreuses possibilités d’application.
Quels sont les désavantages du clonage moléculaire?
Les choix des enzymes de restriction sont limités par la nécessité d’absence de leur site de reconnaissance à l’intérieur des inserts et vecteurs.
Le clonage directionnel ne peut pas se faire avec les enzymes de restriction qui génèrent de bouts franc.
N’est pas efficace pour le clonage de plus de 2 fragments d’ADN.
Laisse le site de restriction comme cicatrices après le clonage directionnel
Expliquez la méthode de clonage par recombinaison Gateway.
Le gène a cloné se situe entre deux extrémités qui sont compatibles avec le vecteur de clonage.
Quels sont les avantages du clonage Gateway?
Le clonage par Gateway est simple est efficace.
Quels sont les désavantages du clonage Gateway?
Les plasmides ainsi que les enzymes Gateway sont dispendieux
On ne peut pas revenir au clonage conventionnel une fois le clonage par Gateway a été terminé (sauf avec une très bonne planification en préalable)
Décrivez la méthode de clonage TOPO.
L’insert est amplifié par polymérase Taq.
Les fragments d’ADN sont incluent dans des vecteurs spécifiques sans avoir besoin d’ADN ligases.
