Chromatographie

Question 1

Quelles sont les deux phases en chromtaographie ?

Answer 1

Mobile et stationnaire

Question 2

Quelles propriétés sont utilisées pour effectuer le fractionnement avec chromatographie?

Answer 2

Interactions inoniques
Taille
Spécificité

Question 3

Comment nomme-t-on le support insoluble auxquels les ions sont liés dans une chromatographie par échange d’ions ?

Answer 3

Échangeur d’anions et de cations

Question 4

De quels paramètres l’affinité avec une laquelle une protéine se lie à l’échangeur d’ion dépend?

Answer 4

le pH
la nature et de la concentration des autres ions en solution

Question 5

Comment choisit-on un échangeur d’ions ?

Answer 5

La nature de leur matrice
Le type de groupement fonctionnel utilisé pour favoriser l’attachement de la protéine

Question 6

Quels polymères sont souvent utilisés

Answer 6

Polysaccharides (cellulose, agarose, etc.)

Question 7

Quelle charge possède un échangeur anionique ?

Answer 7

Positive

Question 8

Décrire un échangeur fort et un échangeur faible

Answer 8

Fort : pleinement chargé entre pH 3 et 10 ishh
Faible : chargé dans une gamme plus restreinte

Question 9

Quelle est la condition pour qu’une protéine prenne la place du contre-ions ?

Answer 9

Que son affinité soit supérieure

Question 10

Comment choisit-on la concentration saline et le pH lors d’une chromatographie par échange d’ions ?

Answer 10

Pour que la protéine se trouve immobilisée sur l’échangeur d’ion

Question 11

Avec quoi lave-t-on la colonne contenant l’échangeur ?

Answer 11

Solution tampon

Question 12

Qu’est-ce que l’élution ?

Answer 12

On augmente la concentration de sel (NaCl et KCl) et le pH pour diminuer l’affinité et permettre aux protéines de se libérer

Question 13

Différence élution fractionnée vs par gradient

Answer 13

Fractionnée, les paramètres sont changés d’un coup vs graduellement =>plus rapide, mais moins précis selon l’affinité

Question 14

Que permet la chromatographie par gel-flitration ?

Answer 14

Séparer les molécules selon leur taille et leur forme

Question 15

Qu’est-ce que la limite d’exclusion dans une chromatographie par gel-filtration ?

Answer 15

La taille des pores

Question 16

Vrai ou Faux, les protéines qui ne passent pas par les pores, sortent plus vites

Answer 16

Vrai

Question 17

Donner 2 exemples de matrices de chromatographies gel-filtration

Answer 17

Polyacrylamide, agarose

Question 18

2 paramètres qui définissent la taille des pores de la matrice

Answer 18

masse moléculaire du polymère<
Nombre de liaisons croisées

Question 19

Quelles sont les limites d’exclusion pour le Sephadex et le Sepharose

Answer 19

Sephadex (0,8-800)kDa
Sepharose (jusqu’à 40 000kDa)

Question 20

Comment peut-on améliorer la séparation des colonnes de chromatographie ?

Answer 20

Colonne plus longue

Question 21

Qu’est-ce que le volume d’élution ?

Answer 21

La quantité de solvant nécessaire pour faire sortir la protéine de la colonne

Question 22

Formule volume élution total

Answer 22

Vt=Vx(V occupé par les billes) + Vo(V de solvant qui entoure les billes )

Question 23

V ou F, les volume d’élution relatif est constant à chaque protéine ?

Answer 23

V, elle permet d’estimer la masse moléculaire d’une protéine

Question 23

Quels sont les axes du graphique permettant de trouver la masse moléculaire avec une chromatographie par gel filtration ?

Answer 23

V d’élution relatif, log de la masse moléculaire

Question 23

Qu’est-ce que la dialyse ? et pourquoi on l’utilise ?

Answer 23

ON utilise une membrane (cellulose) semi-perméable qui sépare les molécules selon leurs tailles

Pour se débarasser des sels

Question 24

Quel polymère utilise-t-on pour la liaison d’un ligand à une matrice ?

Answer 24

Agarose

Question 24

Qu’est-ce que la chromatographie d’affinité ?

Answer 24

Un ligand spécifique à la protéine d’intérêt est fixé de manière covalente à une matrice poreuse inerte

Question 25

Comment peut-on récupérer la protéine désirée après une chromatographie d’affinité ?

Answer 25

En modifiant les condidtions d’élution

Question 26

Décrire la liaison du ligand sur l’agarose

Answer 26

1) Activation de l’agarose avec le bromure de cyanogène
2)Introduction du ligand

Question 27

Que peut-on ajouter à une protéine pour limiter l’interférence stérique avec la matrice d’agarose ?

Answer 27

un bras “espaceur”

Question 28

Comment peut-on détecter la présence d’une protéine après une élution ?

Answer 28

Spectrophotomètre (absorption)
Essai colorimétrique (On met un produit qui réagit au contact d’une autre substance, avec spectro on peut trouver la concentration)
Essai enzymatique
SDS-PAGE
Détection de la protéine avec un anticorps