Manipulation des acides nucléiques

Question 1

Donner 3 propriétés physico-chimiques qu’on utilise pour purifier l’ADN

Answer 1

Taille selon le nombre de nucléotides
Forte charge négative
Structure double brins

Question 2

Quelles liquides peut-on utiliser pour précipiter l’ADN ?

Answer 2

Éthanol (2,5 volume) + 0,25M d’acétate de sodium(éviter la séparation des double brins)

et/ou
Isopropanol

Question 3

Décrire la méthode classique pour précipiter

Answer 3

Ajouter 2,5 volume d’éthanol + 0,25M d’acétate de sodium
-20C pendant 30 minutes => centrifugation à 10 000 RPM pendant 10 minutes à 4C

Question 4

Où se trouve l’ADN après la centrifugation dans le phénol (pH 8)?

Answer 4

Dans la partie aqueuse

Question 5

Sur quel type de gel fait-on l’électrophorèse de l’ADN

Answer 5

Agarose, ils sont trop gros pour les gels polyacrylamide

Question 6

Pourquoi ajoute-on du glycérol dans les puits ?

Answer 6

Pour augmenter leur densité et les faire descendre vers le fond du puit

Question 7

Comment se fait la migration sur SDS-PAGE ?

Answer 7

Selon la taille des fragments d’ADN

Question 8

Comment visualise-t-on l’ADN sur les gels d’électrophorèse

Answer 8

avec des colorants comme le bromure d’éthidium (cancérigène)

Question 9

Exemple spécifique de purification d’ADN avec les mêmes méthodes que les protéines

Answer 9

Chromatographie par échange d’ions (échangeur anionique pour purifier les plus petits fragments)
Filtration sur gel
Chromatographie d’affinité (purifier les ARNm)
Ultracentrifugation sur gradient de chlorure de césium (séparer les plasmides de l’ADN chromosomal des bactéries)

Question 10

De quoi dépend la densité de flottaison de l’ADN

Answer 10

De sa composition en bases (Gc plus denses, AT moins denses)