chapitre 8 mcb2094

Question 1

comment utiliser phage lambda comme vecteur

Answer 1

1. ADN viral et ADN cellulaire coupés avec le même enzyme de restriction
2. ligase va lier ADN cellulaire entre ADN viral et former concatémère
3. lors de encapsidation: chaque phage portera séquence ADN différente
   permet obtenir une génothèque

Question 2

quelles sont les deux méthodes de criblages pour identifier un phage d’intérêt

Answer 2

• transfert sur membrane de cellulose, pis hybridation moléculaire avec ADN radioactif pour trouver phage d’intérêt
• utilisation Ac

Question 3

quelles sont les utilisation du phage T7

Answer 3

• transcription in vitro: utilisation de la polymérase T7 et promoteur T7 devant le gène d’intérêt: formation ARNm du gène d’intérêt
• vecteur expression: expression de pol T7 induit par promoteur sur ADN génome, introduction plasmide portant gène intérêt et promoteur T7: contrôle expression du gène d’intérêt

Question 4

qu’est-ce que le système Cre-Lox

Answer 4

• provient phage P1
• Cre: recombinase et Lox: séquences répétées entourant un gène
  permet d’enlever des gènes spécifiques
  1. souris portant Cre sous action promoteur spécifique à un tissus (dans le but d’enlever gène dans ce tissu)
  2. autre souris portant gène Y flanqué de Lox
  3. croisement de ces souris: induire Cre qui va recombiner les Lox et eliminer gène Y

Question 5

comment peut-on utiliser les phages filamenteux pour créer une librairie d’épitopes

Answer 5

phage display:
1. introduit épitopes au bout d’une protéine exposée sur phage
2. mets phages en contact avec protéine intérêt
3. phage qui a lié protéine va être éluer et multiplier
4. avec ces phages: permet trouver séquence consensus

utilise méthode similiare en introduisant séquence Ac dans le phage: permet d’avoir paratope et lié de plus en plus spécifiquement épitope

Question 6

avantages d’utiliser les phages comme agents antibactériens

Answer 6

• grande spécificité
• possibilité évolution traitement en évolution des bactéries
• capacité traverser biofilms

Question 7

désavantages utiliser phages comme agents antibactériens

Answer 7

• difficile de traiter à large spectre ou utiliser cocktails de phages
• lyse bactérienne pourrait induire toxicité
• SI peut réduire efficacité phage