Chapitre 10 Flashcards
Formule vitesse de migration en électrophorèse
v = E x q / f
Électrophorèse sépare en fonction de…
Masse moléculaire
Quel type de gel utilise-t’on pour l’électrophorèse
Mélange acrylamide et bis-acrylamide
À quoi sert le bis-acrylamide
Formation de ponts entre les chaines d’acrylamide
Agent réticulant
La taille des pores dépend de…
% total d’acrylamide et de bis-acrylamide
Proportion acrylamide/bis-acrylamide
Qu’est-ce qui migre + vite: gel 12% ou 7,5%
7,5%
À quoi sert le persulfate d’ammonium
Fournis les radicaux libres et sert d’initiateur de la réaction
À quoi sert le TEMED
Accélère la réaction de polymérisation
Nommer les 3 types d’électrophorèse
- Conditions non dénaturantes
- Conditions dénaturantes
- Deux dimensions
Nommer les 2 dimensions de l’électrophorèse 2D
- Par isofocalisation
- SDS-PAGE
Séparation dépend de quoi lors de l’électrophorèse en conditions natives (non dénaturantes)
Taille, structure et charge
Définir le point isoélectrique
pH pour lequel la somme des + ou - s’annule
Séparation dépend de quoi lors de l’électrophorèse en conditions dénaturantes
Masse moléculaire
Qu’est ce qu’on peut savoir avec l’électrophorèse en conditions dénaturantes
- Masse moléculaire
- Nombre sous-unités
- Pureté
Nommer 4 agents dénaturants pour les protéines
- Chaleur
- pH
- SDS
- B-mercaptoéthanol + chaleur
Qu’est ce que fait le SDS
Recouvre les molécules de charges négatives
Linéarise la molécule -> perte des structures tertiaires et quaternaires
Nommer les 2 types de systèmes de SDS-PAGE
- Continu
- Discontinu
Définir système continu (SDS-PAGE)
1 seul gel et 1 seul tampon
Définir système discontinu (SDS-PAGE)
2 gels et 2 tampons de pH différent
- Gel de concentration/empilement
- Gel de résolution/séparation
Lequel des systèmes est meilleur et pourquoi
Discontinu, car permet de concentrer les échantillons en 1 fine bande, pour meilleure résolution
Les molécules les + rapides sont en haut ou en bas du gel
En bas
Étapes de purification d’une protéine
- Extrait protéique but
- Étape de purification grossière
- Chromatographie
- Détection présence protéine d’intérêt (pureté et quantité)
Comment connaitre le pI des protéines
Arrête de migrer quand pH=pI
