Chap 2 La Culture Cellulaire

Question 1

Quelles sont les différentes méthodes de culture cellulaire

Answer 1

1.obtention des cellules (A ou B)
A.cellules libres ou circulantes par prélèvement après centrifugation ou facs
B.cellules qui vivent en cohésion les unes avec les autres et constituent un tissu
Elles doivent être isolées : par dissection (plus long) ou méthodes enzymatiques (souvent la trypsine) (enzyme peut être néfaste pour la membrane cellulaire)

2.méthodes de culture (a ou b)
A.base sur l’affinité des cellules pour un support (cultures stationnaires ou mono couches )
B.cultures en suspension (permet le maintient d’une densité cellulaire et un environnement gazeux constant)

3.milieu de culture

Question 2

Expliquer ce qu’est une culture primaire et secondaire et connaître la notion de repiquage

Answer 2

Culture primaire: culture prélevé directement d’un organe ou d’un tissu et n’ayant subi aucun repiquage (prob: finit par arrêter de se repliquer= atteint la sénescence)
Culture secondaire: séquence non interrompue de cultures depuis la culture primaire à l’aide de repiquages successifs (cellules identiques)
Repiquage:transfert d’une population cellulaire d’une flacon de culture à un autre (permet d’amplifier la population cellulaire)

Question 3

Quelles est la solution à la sénescence (les cellules normales se divisent un nombre de fois limite)

Answer 3

Immortalisation en modifiant génétiquement pour proliférer indéfiniment

Question 4

Décrire les différences entre culture primaire et ligne cellulaire

Answer 4

Culture primaire:
\+propriété proche du tissu d’origine 
\+bonne différenciation 
-lourd et délicat 
-reproductibilité 
-prolifération lente et limite 
Ligne cellulaire:
\+facile à manipuler
\+congélation
\+prolifération facile et illimitée 
-propriété différente du tissu d’origine car on a modifié génétiquement 
-origine cancéreuse
-possibilité des perte de différenciation

Question 5

Quelles sont les différences entre cellules souches ES et IPSC

Answer 5

Es: cellules souches embryonnaires (blastocyste)
Peut se différencier en n’importe quel type cellulaire avec différents facteurs de croissance
Prob: long et difficile de trouver la bonne combinaison de facteur de croissance

IPSC:
Prend la cellule différencie et on la ramène au stade de cellules souches en utilisant 4 facteurs de transcription (injecté la séquence du gène= TRANSFECTION)
Prob: si les facteurs ne fonctionne pas, apoptose/mort cellulaire programmé

Question 6

Définir les lignes transitoires et stables.

Avantage et inconvénient

Answer 6

Ligne transitoire: ligne dont la séquence d’ADN n’a pas été intégré au génome(reste sous forme d’épisome dans le noyau de la cellule)
\+rapide
-instable 
-hétérogène (5-50%)
-adn non intégré 

Ligne stable: ligne transformé définitivement. La séquence d’ADN est intégrée dans le génome de la cellule eucaryote 
\+stable
\+homogène
\+adn intégré 
-long

Question 7

Expliquer ce qu’est la trans genèse et gène rapporteurs

Answer 7

Transgenese: technique servant à introduire un gène étranger (transgene) dans le génome d’un organisme, en vue d’obtenir un organisme génétiquement modifié

Gène rapporteur: gênes qui codent pour une protéine que l’on peut «voir» facilement

Question 8

Quels sont les 3 gènes rapporteurs

Answer 8

Gène lacZ pour la galactosidase de la bactérie ecoli (pas cellule vivant)
Doit fixer les tissus

Gène codant pour la gfp (Green fluorescent protein)(cellule vivante)

Gène codant pour la luciferase

Question 9

Expliquer ce qu’est une souris nuée et leurs utilisation

Answer 9

Absence de thymus
Diminution du systeme immunitaire, pas de rejet
Mutation dans un gène de la famille FOXO
très utile en cancérologie