caractérisation d'un peptide Flashcards

1
Q

À quoi correpson la caractérisaition d’un pep ?

A

à la détermination de la séquence d’un enchainement pepq

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Q

par quels méthodes peut on déterminer la séquence d’un enchainement pepq ?

A
  • hydrolyse totale
  • analyse de la séquence
    ☞méthode enzymatique
    ☞” chimiques
    ☞séparation et détermination des ≠ AA
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3
Q

À quoi aboutit l’hydrolyse totale ?

=méthode chimique

A

à une composition brute totale par libération de tous les AA

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4
Q

comment peut se faire l’hydrolyse totale ?

A
  • par chaleur à 105 °C
  • via un acide ex HCl 6 N ou 1/2
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5
Q

que pourra-t-on faire après hydrolyse totale ?

A

identifier et quantifier en % chaque AA à exception du Trp qui est totalement détruit

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6
Q

quel est l’inconvénient de l’hydrolyse totale ?

A

elle ne permet pas de connaitre l’ordre des AA dans le pep =>les liaisons sont détruites : structure primaire n’est pas conservé

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7
Q

analyse de la séquence

que ce passe-t-il lors de la méthode enzymatique ?

A
  • rupture d’une liaison pepq sous action enzyme =peptidase
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8
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique

comment peuvent être les peptidase ?

A
  • des exopepase
  • endopepases
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9
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique

c’est quoi des exopepase ?

A

enzyme qui coupent par extremité avec une action récurrent mais aps au-dela de 3 à 4 AA à chaque fois

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10
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_exopepase

que va-t-on retourve en fonction de l’extrémité ?

A
  • aminopepase
  • ou des caboxypepases
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11
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_exopepase

à partir d’où clivent les aminopepase ?

A

clivent via le NH₂ de l’extrémité N-terminale

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12
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_exopepase

À aprtir d’où clivent les carboxypepase ?

A

à partir de l’extrémité C-terminale

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13
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase

c’est quoi les endopepase ?

A

enzymes qui coupent une liaisons pepq situ”s à l’interieur de la chaîne pepq

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14
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique _endopepase

les endopepase stils sépecifiques à un, pls AA ?

A

oui

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15
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase

quels sont les endopepases ?

A
  • trypsine
  • chymotrypsine
  • pepsine
  • bromure de cyanogène
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16
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase

Où clive la trypsine ?

A

après les AA basique =Lys et Arg

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17
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase

Où clive la chymotrypsine ?

A

après les AA aromatiques = Phe, Tyr et Trp

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18
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase

Où clive la pepsine ?

A

avant les AA aromatiques =Phe et Tyr, Trp exclu

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19
Q

analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase

Où clive le bromure de cyanogène ?

A

après la Met =>réactif non-enzymatique

20
Q

quelles sont les 2 méthodes chimiques qui permettent caractérisation d’un pep ?

A
  • réaction de Sanger ou méthode au dinitrofluorobenzène (DNFB)
  • la réaction d’Edman ou méthode phénylthiocyanate
21
Q

méthodes chimqiue_La réaction de Sanger

à quoi peut se lier le DNFB ?

A

à la fonction NH₂ libre du pe par son F =>formation du dinitrophényl-AA ou DNP-AA

22
Q

méthodes chimqiue_La réaction de Sanger

le DNP-AA est-il facile à identifier ?

23
Q

méthodes chimqiue_La réaction de Sanger

comment est la méthode de la réactiond e Sanger ?

A

non récurrente et est limitée au 1ᵉʳ

24
Q

méthodes chimqiue_La réaction d’Edman

avec quoi réagit le phénylthiocyanate ?

A

avec fonction NH₂ libre du pep =>donne dérivé PTH de l’AA

25
# méthodes chimqiue_La réaction d'Edman comment est la réaction d'
récurrente
26
# méthodes chimqiue_La réaction d'Edman ca veut dire quoi auns une réaction est récurrente ?
le 2ème AA peut être attaque par le réactif puis le 3ème et ainsi de suite
27
# méthodes chimqiue_La réaction d'Edman que ce passe-t-il pour les liaison lors de la réaction d'Edman ?
liaison sur le 1er AA de la chaîne fragilise la 1ère liaison peptidique, d'où la rupture et la libération du dérivé PTH du 1er AA, facile à identifier.
28
quand est-ce qu'on utilise la réaction d'Edman ?
en séquenceur automatique
29
que permet la réaction d'Edman ?
connaitre la séquence du pep attaqué
30
quels sont les méthodes basées sur la chromatographie ?
* chromatographie par échanges d'ions avec calcul du pHi * chromatographie en phase gazeuse * chromatographie d'adsorption
31
quel paramètre intervient dans une électrophorèse sur gel ?
* le pHi * masse moléculaire * et le pH
32
quelle est la fréquence des immunoglobines monoclonales ?
* IgG dans 60% des cas * IgA dans 20 à 30% des cas * Plus rarement IgD ou IgE * Très rarement 2 protéines différentes.
33
est-ce vraiment important de connaitre les ≠ classes de l'immunoglobines ?
oui car les pthologies varient en fonction de la callse d'Ig pertubée
34
est-ce qu'on peut savoir qul typed'Ig est pertubé sur électrophorèse en gel ?
non
35
quels sont les méthodes utilisé pour compléter l'électrophorèse dur gel ?
une des 3 méthodes : * Immunoélectrophorèse * Immunofixation * Immunotypage.
36
sur quoi repose l'immunoélectrophorèse des prot ?
sur el couplage d'une électrophorèse avec une s° contenant des Ag spécifiques
37
que permet de préciser l'immunoélectrophorèse ?
quel type d'Ig monoclonale est sécréte en excès
38
l'immunoélectrophorèse est-elle une méthode quantitative ?
elle n'est pas très quantitative
39
étapes de l'immunoélectrophorèse ?
1. on introduit le sérum à analyser dnas le puits pratiqué dnas la gélose 2. élctrophorèse : migration prot sérique selon chrage et PM 3. introduction de l'antisérum ds gouttière creusée dans la gélose 4. diffusion des Ac et At =>formation arcs de précipitation
40
que permet de mettre en évidence l'immunofixation ?
la classe et le type d'une Ig présente dans le sérum ou les urines d'un patient
41
quel est l'interet de l'immunofixation ?
grand interet pour le diagnositc et le bilan de ctne hémopahties =maladies du sang comme le méylome | elle est plus utiliser que l'immunoélectrophorèse
42
quel est le ppe de 'immunofixation?
* Ac anti-IgG, anti-IgA, anti-IgK ou anti-IgL sont présent ds bandes du gel * après dépôt du sérum à analyser =>bande étroite apparait sit Ig en question est présente
43
pour quoi on utiliser l'immunotypage ?
pour détectrion et confiramtion des gammapathies
44
c'est quoi les gammapathies ?
maladies liés à la prolifération de cell de l'immunité sécrétant ctne Ig
45
l'immunotypage ou l'immuno-soustraction est elle une techniques immuno-chimique qualitative ?
oui