caractérisation d'un peptide Flashcards
À quoi correpson la caractérisaition d’un pep ?
à la détermination de la séquence d’un enchainement pepq
par quels méthodes peut on déterminer la séquence d’un enchainement pepq ?
- hydrolyse totale
- analyse de la séquence
☞méthode enzymatique
☞” chimiques
☞séparation et détermination des ≠ AA
À quoi aboutit l’hydrolyse totale ?
=méthode chimique
à une composition brute totale par libération de tous les AA
comment peut se faire l’hydrolyse totale ?
- par chaleur à 105 °C
- via un acide ex HCl 6 N ou 1/2
que pourra-t-on faire après hydrolyse totale ?
identifier et quantifier en % chaque AA à exception du Trp qui est totalement détruit
quel est l’inconvénient de l’hydrolyse totale ?
elle ne permet pas de connaitre l’ordre des AA dans le pep =>les liaisons sont détruites : structure primaire n’est pas conservé
analyse de la séquence
que ce passe-t-il lors de la méthode enzymatique ?
- rupture d’une liaison pepq sous action enzyme =peptidase
analyse de la séquence_méthode enzymatique
comment peuvent être les peptidase ?
- des exopepase
- endopepases
analyse de la séquence_méthode enzymatique
c’est quoi des exopepase ?
enzyme qui coupent par extremité avec une action récurrent mais aps au-dela de 3 à 4 AA à chaque fois
analyse de la séquence_méthode enzymatique_exopepase
que va-t-on retourve en fonction de l’extrémité ?
- aminopepase
- ou des caboxypepases
analyse de la séquence_méthode enzymatique_exopepase
à partir d’où clivent les aminopepase ?
clivent via le NH₂ de l’extrémité N-terminale
analyse de la séquence_méthode enzymatique_exopepase
À aprtir d’où clivent les carboxypepase ?
à partir de l’extrémité C-terminale
analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase
c’est quoi les endopepase ?
enzymes qui coupent une liaisons pepq situ”s à l’interieur de la chaîne pepq
analyse de la séquence_méthode enzymatique _endopepase
les endopepase stils sépecifiques à un, pls AA ?
oui
analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase
quels sont les endopepases ?
- trypsine
- chymotrypsine
- pepsine
- bromure de cyanogène
analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase
Où clive la trypsine ?
après les AA basique =Lys et Arg
analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase
Où clive la chymotrypsine ?
après les AA aromatiques = Phe, Tyr et Trp
analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase
Où clive la pepsine ?
avant les AA aromatiques =Phe et Tyr, Trp exclu
analyse de la séquence_méthode enzymatique_endopepase
Où clive le bromure de cyanogène ?
après la Met =>réactif non-enzymatique
quelles sont les 2 méthodes chimiques qui permettent caractérisation d’un pep ?
- réaction de Sanger ou méthode au dinitrofluorobenzène (DNFB)
- la réaction d’Edman ou méthode phénylthiocyanate
méthodes chimqiue_La réaction de Sanger
à quoi peut se lier le DNFB ?
à la fonction NH₂ libre du pe par son F =>formation du dinitrophényl-AA ou DNP-AA
méthodes chimqiue_La réaction de Sanger
le DNP-AA est-il facile à identifier ?
oui
méthodes chimqiue_La réaction de Sanger
comment est la méthode de la réactiond e Sanger ?
non récurrente et est limitée au 1ᵉʳ
méthodes chimqiue_La réaction d’Edman
avec quoi réagit le phénylthiocyanate ?
avec fonction NH₂ libre du pep =>donne dérivé PTH de l’AA
méthodes chimqiue_La réaction d’Edman
comment est la réaction d’<edman ?
récurrente
méthodes chimqiue_La réaction d’Edman
ca veut dire quoi auns une réaction est récurrente ?
le 2ème AA peut être attaque par le réactif puis le 3ème et ainsi de suite
méthodes chimqiue_La réaction d’Edman
que ce passe-t-il pour les liaison lors de la réaction d’Edman ?
liaison sur le 1er AA de la chaîne fragilise la 1ère liaison peptidique, d’où la rupture et la libération du dérivé PTH du 1er AA, facile à identifier.
quand est-ce qu’on utilise la réaction d’Edman ?
en séquenceur automatique
que permet la réaction d’Edman ?
connaitre la séquence du pep attaqué
quels sont les méthodes basées sur la chromatographie ?
- chromatographie par échanges d’ions avec calcul du pHi
- chromatographie en phase gazeuse
- chromatographie d’adsorption
quel paramètre intervient dans une électrophorèse sur gel ?
- le pHi
- masse moléculaire
- et le pH
quelle est la fréquence des immunoglobines monoclonales ?
- IgG dans 60% des cas
- IgA dans 20 à 30% des cas
- Plus rarement IgD ou IgE
- Très rarement 2 protéines différentes.
est-ce vraiment important de connaitre les ≠ classes de l’immunoglobines ?
oui car les pthologies varient en fonction de la callse d’Ig pertubée
est-ce qu’on peut savoir qul typed’Ig est pertubé sur électrophorèse en gel ?
non
quels sont les méthodes utilisé pour compléter l’électrophorèse dur gel ?
une des 3 méthodes :
* Immunoélectrophorèse
* Immunofixation
* Immunotypage.
sur quoi repose l’immunoélectrophorèse des prot ?
sur el couplage d’une électrophorèse avec une s° contenant des Ag spécifiques
que permet de préciser l’immunoélectrophorèse ?
quel type d’Ig monoclonale est sécréte en excès
l’immunoélectrophorèse est-elle une méthode quantitative ?
elle n’est pas très quantitative
étapes de l’immunoélectrophorèse ?
- on introduit le sérum à analyser dnas le puits pratiqué dnas la gélose
- élctrophorèse : migration prot sérique selon chrage et PM
- introduction de l’antisérum ds gouttière creusée dans la gélose
- diffusion des Ac et At =>formation arcs de précipitation
que permet de mettre en évidence l’immunofixation ?
la classe et le type d’une Ig présente dans le sérum ou les urines d’un patient
quel est l’interet de l’immunofixation ?
grand interet pour le diagnositc et le bilan de ctne hémopahties =maladies du sang comme le méylome
elle est plus utiliser que l’immunoélectrophorèse
quel est le ppe de ‘immunofixation?
- Ac anti-IgG, anti-IgA, anti-IgK ou anti-IgL sont présent ds bandes du gel
- après dépôt du sérum à analyser =>bande étroite apparait sit Ig en question est présente
pour quoi on utiliser l’immunotypage ?
pour détectrion et confiramtion des gammapathies
c’est quoi les gammapathies ?
maladies liés à la prolifération de cell de l’immunité sécrétant ctne Ig
l’immunotypage ou l’immuno-soustraction est elle une techniques immuno-chimique qualitative ?
oui
