Bio Cell Examen 1 Flashcards
Quels sont les 5 techniques de microscopie
- Microscopie Optique (regular)
- Microscopie à Epifluorescence
- Microscopie Confocale
- Microscopie électronique à transmission
- Microscopie électronique à balayage
C’est quoi la visualisation en contraste de phase
- Les cellules sont transparentes so, ça permet de mieux voir les organites et tout ça
C’est quoi la visualisation en contraste interférentiel
Permet de voir en 3D
3 types de microscopes
- Optique
- Électronique
- Atomique (pas important)
Å = angstrom = x nm
1/10 nm
Pourquoi les cellules sont si petites?
- Un seul noyau contenant l’information (gènes)
(Diffusion de molécules à travers son cytoplasme) - Rapport surface / volume optimal
Quelle sorte de cellule pourrait atteindre le volume le plus grand: une cellule aplatie ou une cellule sphérique?
- La cellule aplati car, il a une distance de diffusion entre l’extracellulaire et le sein de la cellule (organites) est moins importante donc, les nutriments peuvent les atteindre plus facilement.
C’est quoi la Microscopie à epifluorescence
Observation de composantes de cellules vivantes avec des fluorochromes comme le GFP et le immunofluorescence (avec 2 anticorps).
-Utilise les rayons UV pour refleter le fluorescence
C’est quoi la Microscopie confocale (3 caractéristiques)
- Source de lumière : laser,
- plus claire et précise que le Microscopie à epifluorescence
- peut produire des images 3D
Texas Red (rouge) detecte quoi?
Actine F
BODIPY FL (vert) detecte quoi?
Microtubules
DAPI (Bleu) detecte quoi?
Noyau
Microscopie électronique à transmission 1 avantage et 1 désavantage:
avantage
- électrons au lieu de lumière BEST RESOLUTION
désavantage
- Besoin un vide!
Microscopie électronique à balayage
comme le transmission mais seule la surface est observée (2D)
Types de visualisation par microscopie électronique:
- Coloration négative au phototungstate de potassium
(like when a bus drives over a puddle and it hits someone but their shape on the wall behind them remains) - Augmentation du contraste par ombrage par le chrome
(application de chrome d’un coté de l’affaire qui fait un ombrage effect)
Role de l’anticorps secondaire (immunofluorescence)
- Amplifie le fluorescence
et - Spécifique à l’anticorps primaire.
Important to know
Préparation des échantillons de microscopie optique (4 étapes):
Fixation –> Inclusion –> Coupe –> Coloration
Théorie cellulaire (Theodor Schwann) (4 aspects):
- Tous les organismes sont composés d’une ou plusieurs cellules.
- La cellule est l’unité structural de la vie.
- Les cellules ne peuvent provenir que de la division d’une cellule préexistante.
- La plupart des organismes sont unicellulaires.
Niveaux d’organisation cellulaire et moléculaire (9)
- Atomes
- Molécules
- Polymères
- Complexes
- Organites
- Cellules
- Tissus
- Organes
- Organisme
(the way I remember it is thatits abbreviation is AMPc octo-o)
Apoptose : Mort cellulaire programmée caractérisée par…(4)
- Isolement de la cellule (fermeture des jonctions communicantes)
- Perte d’intégrité membranaire
- Condensation et fragmentation de l’ADN
- Dissipation du potentiel mitochondrial
La voie intrinsèque de l’apoptose est activée lorsque…
la cellule est endommagée:
ex:
- Dommages à l’ADN
- Modification du statut d’oxydo-réduction de la cellule
- Accumulation de protéines mal conformées
- Membrane perméable
- Prolifération importante après une infection virale.
La voie extrinsèque de l’apoptose est activée par:
- L’activation de récepteurs d’apoptose
- L’absence de signaux de survie ou de divisions (facteurs de croissance)
Propriétés fondamentales des cellules (11) :
- La vie
- La mort
- La complexité et l’organisation
- Les cellules possèdent un programme génétique
- Les cellules sont capables de se reproduire
- Les cellules acquièrent et utilisent de l’énergie
- Les cellules effectuent différentes réactions chimiques
- Les cellules sont capables d’activités mécaniques
- Les cellules peuvent répondre à des stimuli
- Les cellules sont capables d’autorégulation
- Les cellules évoluent (différenciation)
caractéristiques unique aux procaryotes (3):
o Absence de compactage des chromosomes (et pas d’introns)
o Absence d’organites membranaires
o Les plus diversifiées
caractéristiques unique aux eucaryotes (3):
o Présence d’organites qui ont des membranes
o Présesnce de Chromosomes
o Présence d’Introns et d’Exons
Deux grandes classes des cellules
- Eucaryotes
- Procaryotes
- Caractèristiques commun aux cellules procaryotes et eucaryotes (6):
o Membrane plasmique semblable
o Code génétique (ADN) identique
o Mécanismes de transcription et de traduction semblables
o Voies métaboliques communes
o Utilisation de l’ATP pour stocker de l’énergie
o Mêmes mécanismes de photosynthèse
Comment est-ce que la présence du noyau va ajouter une sélectivité pour l’entrée et la sortie du noyau
- Entrée : les facteurs de transcriptions
Ex : on veut inhiber la transcription donc, il ne laisse pas entrer ces Facteurs de Transcriptions - Sortie : l’ARNm qui va aller au ribosome.
Ex : « mistake ARN » ne va pas aller directement au Ribosome, on peut le dégrader avant qu’il est traduit.
Eubactéries definition
Renferme les procaryotes autres que les archéobactéries
-caractérisées par une paroi de peptidoglycane.
Nommez les 4 similarités des eucaryotes et les archéobactéries
- Leur structure
- Leur métabolisme
- Présence d’introns dans l’ADN
- Présence d’ARN polymérases plus complexes que celles des bactéries
Les archéobactéries (Également des procaryotes) 3 Caractèristiques:
- Extrêmophiles
- Méthanogènes, halophiles, Acidophiles, Thermophiles - Présence de lipides membranaires particuliers (tétraéthers)
- les archéobactéries sont dépourvues d’organites.
Cellules animales vs végétales
- quelles sont les organites que l’autre n’a pas:
Animale:
- Centrioles
Végétale:
- Paroi cellulaire
-Chloroplastes
- Vacuole centrale
Les chloroplastes caractéristiques (3):
- Accomplissent la photosynthèse: captent l’énergie de la lumière du soleil pour en faire des molécules de sucre
- Libèrent de l’O2
- Contiennent leur propre ADN
Appareil de Golgi rôle:
- Reçoit et modifie les molécules synthétisées dans le RE
Réticulum endoplasmique rôle:
- Lieu de production de la plupart des constituants de la membrane plasmique et des matériaux exportés hors de la cellule
- RER porte des ribosomes
Cytoplasme vs Cytosol
- Cytoplasme inclut les organites
- Cytosol = Liquide intracellulaire sans organites
Composantes de la Cytosquelette (3)
- Filaments d’actine
- Microtubules
- Filaments intermédiaires
La fuseau mitotique est formé de __________
microtubules
Culture Cellulaire 2 types:
- Culture primaire
- Lignée cellulaire
- C’est quoi la Culture primaire
o Culture de cellules obtenue directement à partir de l’organisme
- C’est quoi la Lignée cellulaire
o Cellules immortalisées pouvant être maintenues en culture durant une longue période
Cellules HeLa
C’est quoi une cellule HeLa
cellule qui est utilisé le plus commun, (immortalisé)
1 avantage et 1 désavantage des cellules de culture primaire
- Avantage: Propriétés plus représentatives de cellules normales
- Désavantage: Temps de culture limité à quelques jours. (Quantités limitées.)
1 avantage et 1 désavantage des cellules de lignée cellulaire
- Désavantage: Caryotype / phénotype souvent anormal
- Avantage: passage illimité (Passage=dilution, plus de passage, plus de différences du phénotype though.)
l’évolution des organismes pluricellulaires formés de cellules spécialisées est un résultat de la _____________
différenciation cellulaire
Les virus - caractèristiques (4):
- Non-vivant
- Incapable de métabolisme
- Structure : virion
o Assemblage de macromolécules (protéines, ARN, ADN)
o Le matériel génétique est entouré d’une capsule protéique (capside) - Chaque virus possède à sa surface une protéine capable de se lier à un composant membranaire particulier : Spécificité
Types de virus
- Bactériophage(complexe)
- VIH
- Adénovirus (simple)
Deux types d’infection virale et leurs caractèristiques:
(((Les infections peuvent avoir à la fois une phase intégrative et une phase lytique)))
- Infection lytique (lyse)
o Le virus réoriente l’activité de la cellule
Fabrication et assemblage des composantes virales
o Lyse de la cellule pour libérer les virions - Infection intégrative (intègre)
o L’infection ne provoque pas la mort de la cellule
Insère son ADN dans celle de l’hôte: Provirus
o Un agent stimulant peut induire la fabrication de virus et la lyse de la cellule
o Les virus produits peuvent être libérés par bourgeonnement
o Perte de contrôle de la croissance et de la division cellulaire: Cancer
Utilité de l’infection intégrative en recherche
Permet d’introduire des gènes étrangers dans des cellules humaines
-Traitement de maladies par thérapie génique (dopage génétique)
étapes de la centrifugation différentiel (7)
-centrifuge à low speed
-remplace surnageant
-centrifuge à medium speed
-remplace surnageant
-centrifuge à high speed
-remplace surnageant
-centrifuge à fucking high speed
cela donne une culot pas mal pur
(voir diapo 68 du premier powerpoint)
C’est quoi la Cytométrie en flux
et
qu’est-ce qu’il permet de mesurer (2 choses):
- Les cellules en suspension défilent devant un faisceau laser
o Permet de mesurer la taille et la réfringence des cellules grâce à la diffusion de la lumière
o Mesurer l’émission de lumière par des fluorochromes préalablement fixés à certaines composantes cellulaires.
Utilités de la cytométrie en flux (3):
- Les possibilités d’analyses de différents paramètres
o Analyse d’événements rares (1/1000) - Analyses sur des cellules vivantes
- Triage de cellules en fonction de leurs propriétés à
7 fonctions de la membrane
- Perméabilité sélective
- Transport de solutés
- Transfert d’information (hormones)
- Communication/Interactions entre cellules
- Transduction d’énergie (Mitochondrie, Chloroplaste)
- Séquestration des enzymes digestives
- Site de localisation d’enzymes
3 types de lipides sur la membrane :
- Phospholipides (phosphadityl-choline)
- Glycolipides
- Cholestérol
Amphipatiques meaning:
Régions hydrophiles et hydrophobes
phospholipide anatomie
tête = PO4
queue AGras
Micelle:
monocouche de phospholipides
Liposome :
- Vésicules sphériques remplies de liquide (bicouche lipidique)
- Plusieurs applications en recherche (on peut ajouter des médicaments
2 Facteurs qui influencent les la fluidité de la membrane :
1.+ saturé = - fluide
o Plus le niveau d’insaturation est élevé, plus basse est la T° de fusion (transition).
o Plus la longueur des acides gras est courte, plus basse est la T° de transition
2.[ Cholestérol] :
o Plus la teneur en cholestérol ↑
plus la fluidité membranaire ↓
* plus la perméabilité de la membrane ↓
composition en lipides du feuillet interne et externe de la membrane:
Feuillet externe :
- Glycolipides
Feuillet interne:
- Phosphatidylsérine
- Phosphatidylinositol
lorsque des nouveaux phosholipides sont ajoutés à la face externe de la cellule, qu’est-ce qui arrive
L’enzyme flippase va apporter la moitié à la face interne pour égaliser la taille des deux faces.
C’est quoi un radeau lipidique?
Microdomaines formés d’une accumulation de cholestérol et sphingolipides
4 types de protéines membranaires :
- Transporteurs Ex. Pompe Na+/K+
- Ancrage Ex. Intégrines
- Récepteurs Ex. PDGFR
- Enzymes Ex. Adényl-cyclase
Trois classes de protéines membranaires:
- Protéines intrinsèques (transmembranaires, Amphipathiques)
- 20-30% de toutes les protéines codées par la cellule - Protéines périphériques
- Unies par liaisons non covalentes aux têtes polaires de la bicouche et/ou protéines intrinsèques - Côté cytoplasmique ou extracellulaire - Protéines ancrées aux lipides
- Unies par covalence à un groupement lipidique
- Côté cytoplasmique ou extracellulaire
exemples de structures qui sont des protéines membranaires intrinsèques (2):
- Canaux ou transporteurs
- Agents de transfert d’électrons
Les protéines membranaires intrinsèques sont
a. hydrophiles
b. hydrophobes
ou
c. amphipathiques
c. amphipathiques
exemples de structures qui sont des protéines membranaires périphériques (3):
- Protéines d’ancrage
- Enzymes
- Facteurs de transmission de signaux
Les protéines membranaires ancrées aux lipides sont souvent lié à la membrane via un court oligosaccharide uni à un (__1__)
ou lié par une ou plusieurs (__2__ )
- GPI (glycophosphatidylinositol) encastré dans le feuillet externe de la membrane.
- chaînes hydrocarbonées
Role de la squelette membranaire
- Maintient la forme
- Formation d’un réseau hexagonal ou pentagonal qui limite les mouvements des protéines intrinsèques
Composition de la squelette membranaire :
Spectrine attachée par liaisons covalentes à une protéine
périphérique: L’ankyrine
L’ankyrine est unie par liaisons non covalentes à la bande 3
c’est quoi la forme de la squelette membranaire de l’érythrocyte?
hexagonal
Modes de déplacement des protéines intrinsèques (6):
- Diffusion au hasard
- Immobilisée par interaction avec le squelette membranaire
- Direction déterminée par son interaction avec une protéine de la surface cytosolique
- Limité par d’autres protéines intrinsèques
- Limité par des barrières de protéines
- Freinée par des matériaux extracellulaires
… just check diapo 29 of “2. Membrane plasmique H23” for pictures, it’ll help.
Ordre de perméabilité selon le type de molécule
Passent la membrane:
- petites molécules hydrophobes (O2, CO2, N2, benzène)
- petites molécules non-chargés (H2O, glycérol, éthanol)
Besoin d’un pompe/canal pour passer pas le membrane:
- Grandes molécules non-chargés (acide aminées, glucose, nucléosides)
- Ions (H+, Na+, HCO3-, K+, Ca2+, Cl-, Mg2+)
Ordonne en fonction de la perméabilité de la membrane cellulaire
Eau, CO2, Hormones peptidique, glucose, Ca2+, ARN, Éthanol
CO2,
Éthanol,
Eau,
glucose,
Ca2+,
ARN,
Hormones peptidique
Deux voies de diffusion (4 sous-types):
Passive: (Dans le sens du gradient de concentration)
1. Diffusion à travers la bicouche
2. Diffusion à travers un canal protéique
3. Diffusion facilité (transporteur)
Active:
(Dépense d’énergie (hydrolyse ATP) pour transporter les molécules contre un gradient de concentration)
4. Transport actif (transporteur)
Facteurs qui influence la diffusion:
- D’une région de forte concentration à une région de faible concentration
- Il faut aussi tenir compte de la charge des composés
(face externe +, face interne - )- Mêmes charges: Répulsion
- Charges opposées: Attraction
- Perméablilité de la composé envers la membrane
Deux gradients transmembranaires:
- Chimique: Différences de concentration
- Électrique: Différences entre les charges
utilité de la microscopie oculaire
its cheap
utilité de la microscopie à épifluorescence
permet l’observation des cellules vivantes
( ex: noyau et protéines du cytosquelette)
utilité de la microscopie confocale
Possibilité de construire des
images en 3D
utilité de la microscopie électronique à transmission
permet une très grande résolution
utilité de la technique du cryofracture d’une cellulue avant de l’observer par microscopie électroniqe
pour bien voir les organites d’une cellule.
…Kinda like if you cut open an avocado. The seed in the middle is still very observable in 3D because it wasn’t cut with the rest of the avocado.
décrit l’étape 1.la fixation
(préparation des échantillons de microscopie optique))
Elle permet d’immobiliser et de conserver l’échantillon dans le temps, dans un état proche du vivant
décrit l’étape 2. l’inclusion
(préparation des échantillons de microscopie optique))
Elle consiste à rigidifier l’échantillon
décrit l’étape 3. la coupe
(préparation des échantillons de microscopie optique))
on coupe l’échantillon (soit avec une lame fine ou la cryofracture)
décrit l’étape 4.la coloration
(préparation des échantillons de microscopie optique))
La coloration permet d’accentuer les contrastes afin de reconnaître et de différencier des éléments constitutifs du matériel biologique
ex: colortation négative aveg tungstate de potassium ou contraste avec l’ombrage de chrome
pourquoi utilise-t-on une laser pour la microscopie confocale?
La microscopie confocale utilise un laser pour exciter les fluorophores
quelle type de lumière est-ce qui va exciter les fluorophores lors de la microscopie à épifluorescence
Il absorbe la lumière UV invisible et il libère une partie de l’énergie sous forme de lumière visible
Pourquoi la microscopie électronique a une plus grande résolution?
Les électrons ont une longueur d’onde beaucoup plus courte que la lumière visible. Dans l’équation de la résolution, le longueur d’onde est inversement proportionnelle au résolution.
