Aula 1 Flashcards
Quais são as áreas mais rentáveis do diagnóstico molecular?
Oncologia, Doenças onfeciosas, testagem genética
que tipos de teste genéticos existem? quais deles são preditivos
Diagnóstico, (pré simptomáticos e de susceptibilidade)
Como são classificadas as doenças genéticas?
- Monogénicas/mendelianas - autossómicas, ligadas ao X, ligadas ao Y
- mitocondriais
- anormalidades cromossómicas
- multifatorial
Que fatores estão por trás da disrupção do desenvolvimento normal do embrião?
Genetic factors
Genetic abnormalities drugs
Chromosomal abnormalities -
Number and structure
Extrinsic factors
Chemicals
Radiation
Infections
Hipertermia
Metabolic abnormalities (from mother)
Lista as características gerais de diagnóstico pré-natal
- Prevenção
- screening
- diagnóstico
- prognóstico
- terapia
- follow-up
é necessária uma questão concreta para se fazer qualquer tipo de ação
Quais são os objetivos do diagnóstico pré-natal
- Reassure
- Prepare to the born of an affected child
- Treatment in utero
- Birth in a specialized centre
- IVG of an affected foetus
O que se pretende quando se procura uma alteração genética
- There is a reliable DPN test?
- There is a satisfactory treatment for the disease?
- The disease is serious enough to warrant an interruption of
pregnancy? - The couple finds acceptable an interruption of pregnancy in
an affected foetus?
Quais os indicadores para um DPN?
Maternal age > 35 years
* Positive ultrasound screening
* Positive biochemical screening
* Recurrent miscarriages (?)
* Previous child with multiple anomalies undiagnosed
* Previous pregnancy with chromosomal abnormality
* A parent with a balanced structural chromosomal abnormality or
chromosomal mosaicism
* Previous child with a genetic disorder
* Heterozygous parent to a specific genetic disease
* Diseases linked to the X chromosome
* Anxiety????
Qual o trabalho de um geneticista no DPN?
Comunicar o significado e implicações: possibilidade de DPN, prognóstico, risco, tratamento. Também ter em consideração o que isso sifgnifica para a família.
quais podem ser os resultados de um DPN?
normal, anormal, risco, inconclusivo, não obtido
Quais são as técnicas de DPN?
- Amniocentese - para anormalidades cromossómicas
- biópsia do “chorionic villus” - análise do DNA e enzimas, anormalidades cromossómicas
- ultrassom - análise de malformações
- análise de sangue e tecidos do feto - talassemia
- anállise bioquímica do soro materno - betahCG and PAPP-A (Downsyndrome, from 11 to 14 weeks) and Alpha-fetoprotein (AFP) – (neural tube defects and Down syndrome, from 14 weeks)
- células do embrião em circulação no snague da mãe (qPCR)
Qual é a função da fitohemaglutinina
usado em cariótipo - estimula a divisão dos linfócitos T - de onde vão ser extraídos os cromossomas
Para que serve a colchicina
usado em cariótipo - Para a divisão celular em metafase
descreve a obtenção do cariótipo
obtenção da amostra de sangue - adicionar fitohemaglutinina ao meio com as células - cultura durante 3 dias - adicionar colchicina - fixar células - análise das células - digerir com tripsina e corar com Giemsa - análise dos cromossomas
Quais os diferentes tipos de “banding” ?
- G banding (giemsa) - liga-se aos ATs porque desnaturam mais facilmente
- q (quinacrine) banding - igual mas com fluorescência (mais caro)
- R banding (reverse) - o DNA é desnaturado então são as zonas ATs são menos resistentes - não ligam tão bem
- C banding - cora os centrómeros, os cromossomas são tratados com ácido e depois com uma base antes da Giemsa - cora os centrómeros e zonas heterocromáticas
Descreve high resolution karyotype
High Resolution Karyotype:
Conventional analysis allows you to analyse about 400-500 bands
(6000-8000Kb) in 10-15 cells. In the case of suspected mosaicism the
number of cells should be increased to > 30.
Increase the resolution - analysis of chromosomes during the prophase
or pro-metaphase - addition of methotrexate or thymidine followed
by folic acid and colchicine (800 bands).
Qual é a descrição geral de FISH?
(fluorence hibridization in situ)
DNA probes labelled with fluorochromes are
hybridized to chromosomes (metaphase) or
nuclei (interphase), for locating specific
sequences in the genome.
quais são os diferentes tipos de sondas usadas em FISH?
- Painting (cromossoma específico)
- centroméricos
- sequências específicas
- teloméricas
Como identificar translocações/deleções/duplicações usando FISH?
Usar uma sonda identificadora de cromossoma e uma característica para um locus- exs: S. Pradaer-Willi/Angelman, S. Williams, S DiGeorge
COmo podem ser usadas combinações de sondas?
- Break apart (juntas em sitação normal)
- single fusion (separadas em sitação normal)
A que estão associadas anormalidades nos telómeros?
- atrasos no desenvolvimento mental
*
O que é CGH?
Comparative Genomic Hybridization (CGH)
It was developed to overcome the difficulties in obtaining metaphases of good quality in solid tumor preparations. - Tumor DNA and control DNA - labelled with red and green fluorochromes, respectively, and hybridized with normal metaphase chromosomes.
Limitações- Resolução de 10Mb para perdas e 2Mb para ganhos
dificuldades técnicas
Dá exemplos das infeções congénitas mais frequentes.
HIV, Sífilis, Rubéola
