Analisis De Acidos Nucleicos Flashcards
¿Qué es el análisis de ácidos nucleicos?
Es el primer paso para los estudios de biología molecular y para las técnicas de DNA recombinante, secuenciación, mutagénesis
En donde se aplica la extracción del DNA
- medicina forense
- bioinformática
La elección del método de extracción va depender de:
-Tipo de Ac nucleico que se va a extraer
SsDNA, dsDNA, mRNA, rRNA
- Organismo origen del acido nucleico
Procariotes, plantas, mamíferos, virus - Fuente del acido nucleico
Cultivo celular, tejido, sangre, suero, expectoración, orina, LCR - Técnica en que se utilizara el acido nucleico extraído
Célula que no tiene DNA
Eritrocitos
Fuentes de ácidos nucleicos
Sangre Suero Plasma Biopsia Orina Heces Liquido cefalorraquídeo Liquido sinovial, amniótico Esputi Semen Raspado bucal Folículo capilar
¿De que sirve tomar como fuente las heces ?
Conocer bacterias, y microbiota
Como se obtiene el DNA
Lisis de la celula
Separación
Purificación
¿Cómo se extrae el DNA?
Fenol-cloroformo
- se obtiene DNA de buena calidad y cantidad
- es reactivo tóxico
- pérdidas significativas de DNA
- técnica lenta
- Perlas
- técnica más rápida
Técnica fenol-cloroformo
Lisis de las células y liberación DNA
- lisis de eritrocitos: cloruro de amorío
- lisis de membranas celulares y nucleares: con solución SDS (dodecilsulfato sódico)
Extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos
- fenol: cloroformo: alcohol isoamilico 25:24:1
- fase Organica: fenol: lípidos, proteínas y debris celulares
- fase acuosa: ácidos nucleicos
Precipitación de DNA
- sol salina saturada
- etanol 100%
Lavado de DNA
- etanol 70%
- agua
Técnica de columnas
.
¿Cuantos microlitro se ponen en la placa de espectrofotrometría?
1ml
Máquina para saber la pureza del DNA
NanoDrop
¿Qué es la flurometria?
- Unión especifica de colorantes fluorescentes al acido nucleico
- Absorbe la luz a una determinada longitud se onda y emite una onda superior
- La concentración es proporcional
