Análises toxicológicas de matrizes biológicas Flashcards
Aspectos interferentes pré - analíticos
- Compreendem coleta, acondicionamento, identificação, transporte, armazenamento, etc
- A falta de cuidado nessa etapas pode prejudicar a prova;
- Necessário rigor na cadeia de custódia;
Não deve ser usado formol para conservar amostras. Quando for possível usar conservante, será usado o fluoreto de sódio 2%
V ou F
vERDADEIRO.
COLETA DE AMOSTRA DE SANGUE
VIVO:
- coleta por venopunção
- Frasco com Fluoreto de sódio 2%
- P/ alcoolemia: não usar álcool para fazer assepsia local
MORTO:
- coletar das câmaras cardíacas ou veias femorais;
- Não fazer punção às cegas, através da parede torácica; (tem que abrir o tórax)
- Informar o ponto de coleta
- Frasco com fluoreto de sódio 2%
- Em caso de amostra cardíaca ou femoral inviável, coletar do baço.
COLETA DE AMOSTRA DE URINA
VIVO:
- coleta feita pelo periciando;
- a coleta, se possível, deve ser assistida. (Evitar adulteração);
- Se detectar aspecto estranho na amostra: registrar.
MORTO:
- punção e aspiração da bexiga;
- Na ausência da urina na bexiga, coletar o lavado interno com água ou soro; (legista abre a bexiga, lava ela e coleta esse produto)
- Informar na requisição
COLETA DE FRAGMENTO DO FÍGADO
- coleta no lobo hepático direito
- coletar áreas menos putrefeitas
- em putrefeitos, coletar lobo direito e esquerdo
- coletar 50g
COLETA DE CONTEÚDO GÁSTRICO
- material heterogêneo
- coletar o conteúdo na totalidade
- coletar o estômago todo;
- amarrar as extremidades; (evitar perdas)
COLETA DO HUMOR VÍTREO
- Punção com agulha desde canto do olho ao centro;
- Coletar 2-3 mL de humor vítreo em cada olho;
- Conversar com fluoreto de sódio 2%
- Preencher globo ocular com solução salina;
COLETA DE CABELO
- coletar do vértice posterior (occipital)
- Cortar na raiz
- Cortar de 50-200mg
- Se careca: coletar púbis, axila ou braço.
Se o laboratório dispuser de técnicas eficientes de extração e análise, é permitido que se colete volumes menores;
V ou f
Verdadeiro
Nos casos de suspeita de intoxicação por metal ou etilenoglicol, opta-se por coleta de 50g de fragmento do _____________
rim
Nos casos de suspeita de intoxicação por fármacos solúveis em lipídeos, pode ser realizada coleta de 50g de fragmento do _____________
cérebro e tecido adiposo
Nos casos de suspeita de intoxicação por compostos voláteis (Ex: CO) deve-ser realizar coleta de 50g de fragmento do pulmão + coleta amostra de sangue e vedar frascos;
Verdadeiro ou Falso
Verdadeiro
-> Refrigerado em geladeira a 4 graus: conversa por poucos dias
-> Congelado -20 graus: conserva por longos períodos
ESTABILIDADE DOS ANALITOS NAS AMOSTRAS
- Analitos estão sujeitos à degradação;
- A depender da degradação é possível resultado falso negativo;
- É importante conhecer a estabilidade das substâncias
- É importante conhecer a estabilidade a longo prazo, em temperatura, ambiente, refrigerado, congelado e em ciclos de congelamento;
Exemplos:
1. Cianeto em sangue de coelho a - 20 C é instável e perde 31% em 56 dias; ( em sangue humano tbm será instável)
2. Cianeto em sangue de coelho em temperatura ambiente é instável e perde 22% em 1 hora;
3. Heroína e morfina em plasma humano a -20C é estável e resiste pelo menos 14 meses, resiste pelo menos 3 ciclos de congelamento
4. Barbitúricos em plasma a - 20 resistem pelo menos 20 dias e pelo menos 3 ciclos de congelamento;
Análise toxicológica sistemática (ATS)
o que significa ?
Consiste em um conjunto de procedimentos mínimos viáveis para abranger, em conjunto, a análise de um grande número de substâncias de interesse;
Objetivo: evitar pesquisas de infinitas substâncias em diversas amostras quando o legista não sabe qual substancia pesquisar/ não sabe a história do caso;
Realizam-se ensaios presuntivos (triagem inicial) e confirmativos;
O laboratório precisa de um direcionamento para proceder;
é necessário por parte do perito de local e do legista o máximo de informações sobre o caso;
- essas informações e quesitos devem ser encaminhados ao laboratório juntamente com as amostras;
- com as informações o laboratório poderá trabalhar as especificidades do caso e da amostra
O laboratório precisa de um direcionamento para proceder;
é necessário por parte do perito de local e do legista o máximo de informações sobre o caso;
- essas informações e quesitos devem ser encaminhados ao laboratório juntamente com as amostras;
- com as informações o laboratório poderá trabalhar as especificidades do caso e da amostra
A fisiologia e as análises
- Uma vez administrada a substância pode ser encontrada nos fluidos e/ou em órgãos, antes de serem excretadas;
- A amostra a ser analisada vai depender do caso concreto;
- Deve- se escolher as amostras preferenciais para as análises
- Prioriza-se amostras em que a substancia esteja mais concentrada: ex: conteúdo estomacal, urina, sangue, etc.
- às vezes comprimidos ou cápsulas íntegras são vistas no material;
- a presença de comprimidos orienta a busca por fármacos;
- a urina é usada para detectar metabólitos que nela se concentram, sendo favorável por ser uma matriz de composição simples e permite uso de métodos menos complexos
- para cadáver, depois do estômago e urina analisa- se sangue do coração ,e quando aplicável, de outros órgãos, tipo fígado;
- o odor de alho sugere ________________
- o odor de alho sugere organofosforado;
As últimas matrizes usadas são sangue _______ e ______________, uma vez que apresentam pequeno volume. Não são as mais indicadas; sendo reservadas para _____________;
As últimas matrizes usadas são sangue femoral e humor vítreo, uma vez que apresentam pequeno volume. Não são as mais indicadas; sendo reservadas para análises quantitativas;
- O conteúdo gástrico é útil para intoxicações orais com medicamentos e outros;
V ou F
Verdadeiro
- realiza-se previamente a análise organoléptica; (características de um material que podem ser percebidas pelos sentidos humanos)
V ou F
Verdadeiro
MÉTODOS E EQUIPAMENTOS DE ANÁLISES TOXICOLÓGICAS:
- Existe ampla variedade de agentes tóxicos que podem ser pesquisados em uma infinidade de amostras;
- Para isso, existem inúmeros métodos de análises. Estes métodos são executados usando-se ampla variedade de técnicas e equipamentos de análises;
- O emprego dos métodos e o uso dos equipamentos demanda expertise nas áreas de química, farmácia, biologia, bioquímica etc;
- Esses procedimentos são realizados por profissionais dessas áreas, nos laboratórios periciais do Brasil e do mundo.
INTERPRETAÇÃO DOS EXAMES TOXICOLÓGICOS
- Perguntas comuns nos casos de toxicologia;
- O periciando fez uso da droga ou a ele foi administrada a substância?
- O periciando estava sob o efeito da substância detectada?
- A substância estava em quantidade suficiente para causar ou contribuir com o evento investigado?
INFORMAÇÕES DO LAUDO TOXICOLÓGICO
- Quais as substâncias detectadas? Resultado qualitativo.
- Quais as concentrações nas amostras analisadas? Resultado quantitativo.
- Para o adequado entendimento é importante conhecer processos fisiológicos e os post mortem
ASPECTOS FISIOLÓGICOS DE RELEVÂNCIA TOXICOLÓGICA-
CINÉTICA DAS SUBSTÂNCIAS NO ORGANISMO:
- Deve- se atentar para o fato que em um mesmo momento a concentração da substância em diferentes amostras será diferente;
- É como se a análise toxicológica permitisse fotografar apenas um momento de cada vez;
- É importante entender esses processos cinéticos para produzir e interpretar os laudos toxicológicos
Em concentrações maiores, são mais intensos os efeitos no local de ação
Os locais de ação são:
- neurônios do sistema respiratório ou nervoso;
- células do músculo cardíaco
- hemoglobina
A concentração no sangue é o parâmetro mais usado na avaliação toxicológica;
Verdadeiro
A substância só terá efeito perceptível se a concentração no sangue for suficiente;
Verdadeiro
Fármacos apresentam níveis tóxicos quando a concentração for maior que a concentração terapêutica;
V ou F
Verdadeiro
Conceito de tolerância
Necessidade de usar doses maiores para a obtenção do efeito farmacológico esperado;
TOLERÂNCIA:
A) Tolerância farmacodinâmica ou tissular:
B) Tolerância metabólica ou disposicional:
A) Tolerância farmacodinâmica ou tissular:
- resposta diminuída;
B) Tolerância metabólica ou disposicional:
- chega uma menor quantidade da substância no local de ação;
Conceito de tolerância cruzada:
- uso repetido de uma droga leva à diminuição da resposta do organismo não apenas a essa droga, mas também a outras drogas com estruturas e mecanismos de ação semelhantes
Ex: usuário de drogas ilícitas, como a heroína, que desenvolve tolerância a essa substância. A heroína é um opioides, assim como a morfina, que é frequentemente usada em ambientes médicos;
Ex: heroína e morfina;
Ex: etanol e barbitúricos;
Ex: etanol e anestésicos;
Acumulação nos tecidos:
- O paraquat, herbicida, quaternário de amônio, acumula-se __________ e é muito tóxico.
- O paraquat, herbicida, quaternário de amônio, acumula-se nos pulmões e é muito tóxico.
Acumulação nos tecidos:
Sobre o THC:
- é extremamente lipossolúvel, acumulando-se no tecido adiposo;
- Cessado o uso, ocorre a liberação do tecido para o sangue;
- Usuários ocasionais podem apresentar metabólito na urina até 5 dias;
- Usuários crônicos podem apresentar metabólito na urina até mais de 30 dias depois de cessado o consumo.
V ou F
Todas verdadeiras;
INTERFERÊNCIAS DOS ASPECTOS POST MORTEM NAS ANÁLISES TOXICOLÓGICAS:
- A decomposição do cadáver interfere alterando os componentes químicos do corpo do cadáver;
- A presença de micro-organismos pode acelerar a decomposição da substancia de interesse;
- deslocamento post mortem: a substância de interesse pode se deslocar no corpo do cadáver pelos fluidos corporais.
ASPECTOS POST MORTEM DE RELEVÂNCIA TOXICOLÓGICA
PUTREFAÇÃO E CONSERVAÇÃO DE CADÁVERES;
- A aplicação de substâncias químicas no corpo para conservar o cadáver também interfere na análise toxicológica; Ex: uso de formol. (Formol é muito reativo e dilui a substância de interesse)
- É comum a necessidade de exames toxicológicos em putrefeitos;
- A putrefação decompõe substâncias de interesse e também introduz interferentes na matriz;
- Ação de micro-organismos;
- Fatores ambientais (podem até introduzir contaminantes)
- Os analitos podem não ser detectados;
- Podem ser detectados em quantidades menores da substância de interesse;
- Interferentes podem fornecer resultados falso- positivos;
- O etanol é uma dessas substâncias que podem fornecer resultados diferentes no post mortem.
- A conservação de cadáver com formol pode alterar as análises;
- Nesses casos recomenda-se a análise do humor vítreo; (fluído menos suscetível à decomposição)
- Atentar para o fato do deslocamento post mortem de substâncias; (substâncias químicas podem se movimentos no corpo do cadáver devido a movimentação dos fluidos), alterando a concentração da amostra em determinada matriz;
RESULTADOS QUALITATIVOS X QUANTITATIVOS
- às vezes a simples detecção é suficiente para provar;
- O simples resultado negativo às vezes não é suficiente;
- As metodologias empregadas podem não ser suficientes para detectar determinada substância;
- Falsos positivos podem ocorrer por degradação da substância;
- A conservação da amostra pode interferir;
- Dados quantitativos são mais confiáveis
- A análise é mais simples nos vivos;
- Para mortos, coleta-se amostras diversas; e analisa-se todas, de preferência, fazendo um estudo conjunto dos resultados obtidos;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
A) SANGUE:
- Matriz mais importante para a toxicologia;
- A maior parte dos valores de referência referem-se ao sangue;
- O local de coleta é importante
- A difusão/redistribuição pode alterar os valores. Para contornar isso, dá-se- preferência da amostra da femoral;
(Pois está mais distante da região toraco-abdominal, onde ocorre mais a movimentação dos fluidos) - Amostras cardíacas: detecção e identificação da substância (qualitativo)
- Amostras femorais: quantificação;
- Resultados semelhantes indicam que não houve difusão/ redistribuição;
- A conservação da amostra também é importante;
No que diz respeito à matriz sangue:
- Amostras cardíacas: úteis para a quantificação.
V ou F
Falso.
qualitativo.
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
B) FÍGADO:
- O fígado é considerado uma das melhores matrizes (Boas referencias na literatura) (só perde pro sangue)
- É útil quando não é possível coletar sangue;
- É útil nos casos de decomposição e carbonizados;
- É útil para a pesquisa de antidepressivos tricíclicos e fenotiazinas;
- É útil para pesquisar substâncias lipofílicas ou que se ligam a proteínas hepáticas;
- Dá-se preferência ao lobo direito;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
B) FÍGADO:
- O fígado é considerado uma matriz biológica melhor do que o sangue.
V ou F
Falso.
É a segunda melhor. Só perde para o sangue;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
B) FÍGADO:
- É inútil nos casos de decomposição e carbonizados;
V ou f
Falso.
É muito útil nesses casos;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
B) FÍGADO:
- É útil para a pesquisa de __________________ e _______________
antidepressivos tricíclicos e fenotiazinas
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
B) FÍGADO:
- Dá-se preferência ao lobo esquerdo.
V ou F
Qual a quantidade em gramas que se deve retirar p/ análise?
Falso.
Dá-se preferência ao lobo direito.
Mas em corpos em decomposição, coleta-se dos 2 lobos.
Fragmentos totalizando 50g de amostra de fígado.
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
C) URINA:
- Composição simples e de fácil análise;
- Ponto negativos:
a) dados não são muito confiáveis se analisada isoladamente
b) Desidratação, pH da urina, taxa de metabolismo podem alterar os valores;
c) Doenças renais;
d) Devem ser interpretados em conjunto com outros resultados;
e) Pode apresentar metabólitos comuns a mais de uma substância: ex heroína, codeína e morfina vão apresentar o metabólito morfina 3- glucoronídeo (M3G);
- 3- glucoronídeo (M3G): individuo pode apresentar valores altos na urina e valores baixos no sangue, mesmo após muito tempo do uso;
- A não detecção na urina pode significar tempo curto desde a administração;
- A urina é útil na detecção de depressores no “boa noite cinderela” (fármacos de MV longa)
- Permite detectar a droga dias depois
- Maior janela de detecção
- Essas drogas podem não ser detectadas no sangue;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
D) ESTÔMAGO E SEU CONTEÚDO
- Toda substância administrada via oral poderá ser detectada no estômago; (principalmente é cadáveres, é uma excelente matriz)
- A ausência da substância no estômago não afasta intoxicação (pode ter ocorrido vômito ou esvaziamento)
- A quantidade encontrada, se elevada, sugere intoxicação;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
E) HUMOR VÍTREO
- Vantagem: Longe da cavidade toraco - abdominal;
- matriz sem interferência de difusão post mortem
- Protegida da colonização de micro-organismos;
- Menos suscetível a alterações da decomposição;
Desvantagem: pequena quantidade de amostra;
CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS
F) CABELO:
- Cresce a apresentação de procedimentos de análises toxicológicas em cabelo;
- Fornece maior janela de detecção;
- Meses depois do uso permite detectar ex: Fentanil, morfina, heroína, cocaína, barbitúricos, anfetaminas, etc;
- Cada 1 cm guarda em média um mês de janela;
- Cosméticos, luz, sebo do couro cabeludo e calor podem interferir nos exames;
- Contaminação exógena por interferentes atmosféricos pode interferir fornecendo falso - positivos
- O cabelo deve passar por etapa de descontaminação para análise;
- A não detecção apenas sugere o não uso. (Não determina, pois pode haver uma quantidade pequena, inferior ao limite de detecção do método empregado)
CONSIDERAÇÕES FINAIS
- A produção e interpretação de exames toxicológicos é complexa
- Os resultados devem ser interpretados com cautela;
- Deve-se tentar minimizar as dificuldades relacionados as etapas
- Cuidados pré - analíticos
- Coleta adequada e a abundante de múltiplas matrizes
- Uso de equipamentos e metodologias seletivas e sensíveis;
- Trata-se de exames indispensáveis em determinados casos;
- A interpretação dos resultados deve considerar inúmeras variáveis;
