Análises toxicológicas de matrizes biológicas

Question 1

Aspectos interferentes pré - analíticos

Answer 1

• Compreendem coleta, acondicionamento, identificação, transporte, armazenamento, etc
• A falta de cuidado nessa etapas pode prejudicar a prova;
• Necessário rigor na cadeia de custódia;

Question 2

Não deve ser usado formol para conservar amostras. Quando for possível usar conservante, será usado o fluoreto de sódio 2%

V ou F

Answer 2

vERDADEIRO.

Question 3

COLETA DE AMOSTRA DE SANGUE

Answer 3

VIVO:
- coleta por venopunção
- Frasco com Fluoreto de sódio 2%
- P/ alcoolemia: não usar álcool para fazer assepsia local

MORTO:
- coletar das câmaras cardíacas ou veias femorais;
- Não fazer punção às cegas, através da parede torácica; (tem que abrir o tórax)
- Informar o ponto de coleta
- Frasco com fluoreto de sódio 2%
- Em caso de amostra cardíaca ou femoral inviável, coletar do baço.

Question 4

COLETA DE AMOSTRA DE URINA

Answer 4

VIVO:
- coleta feita pelo periciando;
- a coleta, se possível, deve ser assistida. (Evitar adulteração);
- Se detectar aspecto estranho na amostra: registrar.

MORTO:
- punção e aspiração da bexiga;
- Na ausência da urina na bexiga, coletar o lavado interno com água ou soro; (legista abre a bexiga, lava ela e coleta esse produto)
- Informar na requisição

Question 5

COLETA DE FRAGMENTO DO FÍGADO

Answer 5

• coleta no lobo hepático direito
• coletar áreas menos putrefeitas
• em putrefeitos, coletar lobo direito e esquerdo
• coletar 50g

Question 5

COLETA DE CONTEÚDO GÁSTRICO

Answer 5

• material heterogêneo
• coletar o conteúdo na totalidade
• coletar o estômago todo;
• amarrar as extremidades; (evitar perdas)

Question 6

COLETA DO HUMOR VÍTREO

Answer 6

• Punção com agulha desde canto do olho ao centro;
• Coletar 2-3 mL de humor vítreo em cada olho;
• Conversar com fluoreto de sódio 2%
• Preencher globo ocular com solução salina;

Question 7

COLETA DE CABELO

Answer 7

• coletar do vértice posterior (occipital)
• Cortar na raiz
• Cortar de 50-200mg
• Se careca: coletar púbis, axila ou braço.

Question 8

Se o laboratório dispuser de técnicas eficientes de extração e análise, é permitido que se colete volumes menores;

V ou f

Answer 8

Verdadeiro

Question 9

Nos casos de suspeita de intoxicação por metal ou etilenoglicol, opta-se por coleta de 50g de fragmento do _____________

Answer 9

rim

Question 10

Nos casos de suspeita de intoxicação por fármacos solúveis em lipídeos, pode ser realizada coleta de 50g de fragmento do _____________

Answer 10

cérebro e tecido adiposo

Question 11

Nos casos de suspeita de intoxicação por compostos voláteis (Ex: CO) deve-ser realizar coleta de 50g de fragmento do pulmão + coleta amostra de sangue e vedar frascos;

Verdadeiro ou Falso

Answer 11

Verdadeiro

Question 12

-> Refrigerado em geladeira a 4 graus: conversa por poucos dias

-> Congelado -20 graus: conserva por longos períodos

Question 13

ESTABILIDADE DOS ANALITOS NAS AMOSTRAS

• Analitos estão sujeitos à degradação;
• A depender da degradação é possível resultado falso negativo;
• É importante conhecer a estabilidade das substâncias
• É importante conhecer a estabilidade a longo prazo, em temperatura, ambiente, refrigerado, congelado e em ciclos de congelamento;

Exemplos:
1. Cianeto em sangue de coelho a - 20 C é instável e perde 31% em 56 dias; ( em sangue humano tbm será instável)
2. Cianeto em sangue de coelho em temperatura ambiente é instável e perde 22% em 1 hora;
3. Heroína e morfina em plasma humano a -20C é estável e resiste pelo menos 14 meses, resiste pelo menos 3 ciclos de congelamento
4. Barbitúricos em plasma a - 20 resistem pelo menos 20 dias e pelo menos 3 ciclos de congelamento;

Question 14

Análise toxicológica sistemática (ATS)

o que significa ?

Answer 14

Consiste em um conjunto de procedimentos mínimos viáveis para abranger, em conjunto, a análise de um grande número de substâncias de interesse;

Objetivo: evitar pesquisas de infinitas substâncias em diversas amostras quando o legista não sabe qual substancia pesquisar/ não sabe a história do caso;

Realizam-se ensaios presuntivos (triagem inicial) e confirmativos;

O laboratório precisa de um direcionamento para proceder;
é necessário por parte do perito de local e do legista o máximo de informações sobre o caso;

• essas informações e quesitos devem ser encaminhados ao laboratório juntamente com as amostras;
• com as informações o laboratório poderá trabalhar as especificidades do caso e da amostra

Question 15

O laboratório precisa de um direcionamento para proceder;
é necessário por parte do perito de local e do legista o máximo de informações sobre o caso;

• essas informações e quesitos devem ser encaminhados ao laboratório juntamente com as amostras;
• com as informações o laboratório poderá trabalhar as especificidades do caso e da amostra

Question 16

A fisiologia e as análises

• Uma vez administrada a substância pode ser encontrada nos fluidos e/ou em órgãos, antes de serem excretadas;
• A amostra a ser analisada vai depender do caso concreto;
• Deve- se escolher as amostras preferenciais para as análises
• Prioriza-se amostras em que a substancia esteja mais concentrada: ex: conteúdo estomacal, urina, sangue, etc.
• às vezes comprimidos ou cápsulas íntegras são vistas no material;
• a presença de comprimidos orienta a busca por fármacos;
• a urina é usada para detectar metabólitos que nela se concentram, sendo favorável por ser uma matriz de composição simples e permite uso de métodos menos complexos
• para cadáver, depois do estômago e urina analisa- se sangue do coração ,e quando aplicável, de outros órgãos, tipo fígado;

Question 17

• o odor de alho sugere ________________

Answer 17

• o odor de alho sugere organofosforado;

Question 18

As últimas matrizes usadas são sangue _______ e ______________, uma vez que apresentam pequeno volume. Não são as mais indicadas; sendo reservadas para _____________;

Answer 18

As últimas matrizes usadas são sangue femoral e humor vítreo, uma vez que apresentam pequeno volume. Não são as mais indicadas; sendo reservadas para análises quantitativas;

Question 19

• O conteúdo gástrico é útil para intoxicações orais com medicamentos e outros;

V ou F

Answer 19

Verdadeiro

Question 20

• realiza-se previamente a análise organoléptica; (características de um material que podem ser percebidas pelos sentidos humanos)

V ou F

Answer 20

Verdadeiro

Question 21

MÉTODOS E EQUIPAMENTOS DE ANÁLISES TOXICOLÓGICAS:

• Existe ampla variedade de agentes tóxicos que podem ser pesquisados em uma infinidade de amostras;
• Para isso, existem inúmeros métodos de análises. Estes métodos são executados usando-se ampla variedade de técnicas e equipamentos de análises;
• O emprego dos métodos e o uso dos equipamentos demanda expertise nas áreas de química, farmácia, biologia, bioquímica etc;
• Esses procedimentos são realizados por profissionais dessas áreas, nos laboratórios periciais do Brasil e do mundo.

Question 22

INTERPRETAÇÃO DOS EXAMES TOXICOLÓGICOS

• Perguntas comuns nos casos de toxicologia;
• O periciando fez uso da droga ou a ele foi administrada a substância?
• O periciando estava sob o efeito da substância detectada?
• A substância estava em quantidade suficiente para causar ou contribuir com o evento investigado?

Question 23

INFORMAÇÕES DO LAUDO TOXICOLÓGICO

• Quais as substâncias detectadas? Resultado qualitativo.
• Quais as concentrações nas amostras analisadas? Resultado quantitativo.
• Para o adequado entendimento é importante conhecer processos fisiológicos e os post mortem

Question 24

ASPECTOS FISIOLÓGICOS DE RELEVÂNCIA TOXICOLÓGICA-

CINÉTICA DAS SUBSTÂNCIAS NO ORGANISMO:

• Deve- se atentar para o fato que em um mesmo momento a concentração da substância em diferentes amostras será diferente;
• É como se a análise toxicológica permitisse fotografar apenas um momento de cada vez;
• É importante entender esses processos cinéticos para produzir e interpretar os laudos toxicológicos

Question 25

Em concentrações maiores, são mais intensos os efeitos no local de ação

Os locais de ação são:

Answer 25

• neurônios do sistema respiratório ou nervoso;
• células do músculo cardíaco
• hemoglobina

Question 26

A concentração no sangue é o parâmetro mais usado na avaliação toxicológica;

Answer 26

Verdadeiro

Question 27

A substância só terá efeito perceptível se a concentração no sangue for suficiente;

Answer 27

Verdadeiro

Question 28

Fármacos apresentam níveis tóxicos quando a concentração for maior que a concentração terapêutica;

V ou F

Answer 28

Verdadeiro

Question 29

Conceito de tolerância

Answer 29

Necessidade de usar doses maiores para a obtenção do efeito farmacológico esperado;

Question 30

TOLERÂNCIA:

A) Tolerância farmacodinâmica ou tissular:

B) Tolerância metabólica ou disposicional:

Answer 30

A) Tolerância farmacodinâmica ou tissular:
- resposta diminuída;

B) Tolerância metabólica ou disposicional:
- chega uma menor quantidade da substância no local de ação;

Question 31

Conceito de tolerância cruzada:

Answer 31

• uso repetido de uma droga leva à diminuição da resposta do organismo não apenas a essa droga, mas também a outras drogas com estruturas e mecanismos de ação semelhantes

Ex: usuário de drogas ilícitas, como a heroína, que desenvolve tolerância a essa substância. A heroína é um opioides, assim como a morfina, que é frequentemente usada em ambientes médicos;

Ex: heroína e morfina;
Ex: etanol e barbitúricos;
Ex: etanol e anestésicos;

Question 32

Acumulação nos tecidos:

• O paraquat, herbicida, quaternário de amônio, acumula-se __________ e é muito tóxico.

Answer 32

• O paraquat, herbicida, quaternário de amônio, acumula-se nos pulmões e é muito tóxico.

Question 33

Acumulação nos tecidos:

Sobre o THC:

• é extremamente lipossolúvel, acumulando-se no tecido adiposo;
• Cessado o uso, ocorre a liberação do tecido para o sangue;
• Usuários ocasionais podem apresentar metabólito na urina até 5 dias;
• Usuários crônicos podem apresentar metabólito na urina até mais de 30 dias depois de cessado o consumo.

V ou F

Answer 33

Todas verdadeiras;

Question 34

INTERFERÊNCIAS DOS ASPECTOS POST MORTEM NAS ANÁLISES TOXICOLÓGICAS:

• A decomposição do cadáver interfere alterando os componentes químicos do corpo do cadáver;
• A presença de micro-organismos pode acelerar a decomposição da substancia de interesse;
• deslocamento post mortem: a substância de interesse pode se deslocar no corpo do cadáver pelos fluidos corporais.

Question 35

ASPECTOS POST MORTEM DE RELEVÂNCIA TOXICOLÓGICA
PUTREFAÇÃO E CONSERVAÇÃO DE CADÁVERES;

• A aplicação de substâncias químicas no corpo para conservar o cadáver também interfere na análise toxicológica; Ex: uso de formol. (Formol é muito reativo e dilui a substância de interesse)
• É comum a necessidade de exames toxicológicos em putrefeitos;
• A putrefação decompõe substâncias de interesse e também introduz interferentes na matriz;
• Ação de micro-organismos;
• Fatores ambientais (podem até introduzir contaminantes)
• Os analitos podem não ser detectados;
• Podem ser detectados em quantidades menores da substância de interesse;
• Interferentes podem fornecer resultados falso- positivos;
• O etanol é uma dessas substâncias que podem fornecer resultados diferentes no post mortem.
• A conservação de cadáver com formol pode alterar as análises;
• Nesses casos recomenda-se a análise do humor vítreo; (fluído menos suscetível à decomposição)
• Atentar para o fato do deslocamento post mortem de substâncias; (substâncias químicas podem se movimentos no corpo do cadáver devido a movimentação dos fluidos), alterando a concentração da amostra em determinada matriz;

Question 36

RESULTADOS QUALITATIVOS X QUANTITATIVOS

• às vezes a simples detecção é suficiente para provar;
• O simples resultado negativo às vezes não é suficiente;
• As metodologias empregadas podem não ser suficientes para detectar determinada substância;
• Falsos positivos podem ocorrer por degradação da substância;
• A conservação da amostra pode interferir;
• Dados quantitativos são mais confiáveis
• A análise é mais simples nos vivos;
• Para mortos, coleta-se amostras diversas; e analisa-se todas, de preferência, fazendo um estudo conjunto dos resultados obtidos;

Question 37

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

A) SANGUE:

• Matriz mais importante para a toxicologia;
• A maior parte dos valores de referência referem-se ao sangue;
• O local de coleta é importante
• A difusão/redistribuição pode alterar os valores. Para contornar isso, dá-se- preferência da amostra da femoral;
  (Pois está mais distante da região toraco-abdominal, onde ocorre mais a movimentação dos fluidos)
• Amostras cardíacas: detecção e identificação da substância (qualitativo)
• Amostras femorais: quantificação;
• Resultados semelhantes indicam que não houve difusão/ redistribuição;
• A conservação da amostra também é importante;

Question 38

No que diz respeito à matriz sangue:

• Amostras cardíacas: úteis para a quantificação.

V ou F

Answer 38

Falso.

qualitativo.

Question 39

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

B) FÍGADO:

• O fígado é considerado uma das melhores matrizes (Boas referencias na literatura) (só perde pro sangue)
• É útil quando não é possível coletar sangue;
• É útil nos casos de decomposição e carbonizados;
• É útil para a pesquisa de antidepressivos tricíclicos e fenotiazinas;
• É útil para pesquisar substâncias lipofílicas ou que se ligam a proteínas hepáticas;
• Dá-se preferência ao lobo direito;

Question 40

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

B) FÍGADO:

• O fígado é considerado uma matriz biológica melhor do que o sangue.

V ou F

Answer 40

Falso.

É a segunda melhor. Só perde para o sangue;

Question 41

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

B) FÍGADO:

• É inútil nos casos de decomposição e carbonizados;

V ou f

Answer 41

Falso.

É muito útil nesses casos;

Question 42

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

B) FÍGADO:

• É útil para a pesquisa de __________________ e _______________

Answer 42

antidepressivos tricíclicos e fenotiazinas

Question 43

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

B) FÍGADO:

• Dá-se preferência ao lobo esquerdo.

V ou F

Qual a quantidade em gramas que se deve retirar p/ análise?

Answer 43

Falso.

Dá-se preferência ao lobo direito.
Mas em corpos em decomposição, coleta-se dos 2 lobos.

Fragmentos totalizando 50g de amostra de fígado.

Question 44

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

C) URINA:

• Composição simples e de fácil análise;
• Ponto negativos:
  a) dados não são muito confiáveis se analisada isoladamente

b) Desidratação, pH da urina, taxa de metabolismo podem alterar os valores;
c) Doenças renais;
d) Devem ser interpretados em conjunto com outros resultados;
e) Pode apresentar metabólitos comuns a mais de uma substância: ex heroína, codeína e morfina vão apresentar o metabólito morfina 3- glucoronídeo (M3G);

• 3- glucoronídeo (M3G): individuo pode apresentar valores altos na urina e valores baixos no sangue, mesmo após muito tempo do uso;
• A não detecção na urina pode significar tempo curto desde a administração;
• A urina é útil na detecção de depressores no “boa noite cinderela” (fármacos de MV longa)
• Permite detectar a droga dias depois
• Maior janela de detecção
• Essas drogas podem não ser detectadas no sangue;

Question 45

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

D) ESTÔMAGO E SEU CONTEÚDO

• Toda substância administrada via oral poderá ser detectada no estômago; (principalmente é cadáveres, é uma excelente matriz)
• A ausência da substância no estômago não afasta intoxicação (pode ter ocorrido vômito ou esvaziamento)
• A quantidade encontrada, se elevada, sugere intoxicação;

Question 46

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

E) HUMOR VÍTREO

• Vantagem: Longe da cavidade toraco - abdominal;
• matriz sem interferência de difusão post mortem
• Protegida da colonização de micro-organismos;
• Menos suscetível a alterações da decomposição;

Desvantagem: pequena quantidade de amostra;

Question 47

CONSIDERAÇÕES SOBRE AS AMOSTRAS

F) CABELO:

• Cresce a apresentação de procedimentos de análises toxicológicas em cabelo;
• Fornece maior janela de detecção;
• Meses depois do uso permite detectar ex: Fentanil, morfina, heroína, cocaína, barbitúricos, anfetaminas, etc;
• Cada 1 cm guarda em média um mês de janela;
• Cosméticos, luz, sebo do couro cabeludo e calor podem interferir nos exames;
• Contaminação exógena por interferentes atmosféricos pode interferir fornecendo falso - positivos
• O cabelo deve passar por etapa de descontaminação para análise;
• A não detecção apenas sugere o não uso. (Não determina, pois pode haver uma quantidade pequena, inferior ao limite de detecção do método empregado)

Question 48

CONSIDERAÇÕES FINAIS

• A produção e interpretação de exames toxicológicos é complexa
• Os resultados devem ser interpretados com cautela;
• Deve-se tentar minimizar as dificuldades relacionados as etapas
• Cuidados pré - analíticos
• Coleta adequada e a abundante de múltiplas matrizes
• Uso de equipamentos e metodologias seletivas e sensíveis;
• Trata-se de exames indispensáveis em determinados casos;
• A interpretação dos resultados deve considerar inúmeras variáveis;