Aislamiento e identificación de microorganismos. Flashcards
Según el monomorfismo todos los microorganismos presentan una misma morfología y metabolismo; ¿cómo se llama la teoría que se le opone y qué defiende?
Pleomorfismo
Existe unasgran variación entre el aspecto morfológico y las características fisiológicas de cada microorganismo
¿Cómo se llama un cultivo que contiene un único tipo de microorganismo?
CUltivo puro
Los cultivos puros son útiles por diferentes razones: mantienen los organismos viables, permiten hacer subcultivos para someterlos a diferentes análisis e intercambiarlos con otros laboratorios.
Las técnicas de aislamiento son aquellas que nos permiten obtener un cultivo puro
V
El proceso consiste en disponer de la descendencia de un individuo (célula) inmovilizada sobre la superficie de un medio sólido y separada del resto de individuos presentes en el cultivo mixto. Esta célula, en las condiciones de crecimiento adecuadas dará lugar a una descendencia (clon) macroscópicamente visible (colonia).
Distingue entre los conceptos de clon y colonia
Clon: descendencia idéntica a la célula progenitora de la que proviene
Colonia: descendencia macroscópicamente visible (muchas células agregadas).
Integrada por millones-miles de millones de células que proceden de una misma célula/grupo de células y tienen las mismas propiedades.
La descendencia de una misma colonia dará un cultivo puro
V
Las unidades formadoras de colonias son el número total de bacterias que integran una colonia.
F
Son la célula/grupo de células que dieron lugar a una colonia, el origen de esta.
La gelatina no es un buen agente solidificante porque algunos microorganismos la pueden usar para su crecimiento
V
Ha sido sustituida por el agar, un polisacárido que se obtiene de algunas algas rojas y para pasar de sólido a líquido se debe calentar por encima de los 100°C y una vez fundido es mantiene líquido hasta enfriarse a 44°C.
Define inóculo
Masa microbiana con la que se siembra un medio de cultivo.
Cómo evitamos contaminaciones a la hora de inocular un medio de cultivo?
Con el mechero Bunsen
Trabajando a su lado y flambeando los tubos y asas de siembra
Por qué invertimos las placas de Petri?
invertida para evitar que el agua de condensación se deposite sobre la superficie del agar, lo cual impediría la obtención de colonias aisladas.
Aislamiento por estría escocesa/agotamiento en placa
Método cualitativo de aislamiento de microorganismos a partir de una muestra natural o de un cultivo de laboratorio. Este método está basado en arrastrar, mediante un asa de siembra, un número cada vez más pequeño de individuos. Es un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inóculo sobre un medio sólido en placa de Petri. El objetivo es obtener, a partir de un elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la placa. Al incubar la placa, y dejarlas crecer, cada una originará una colonia.
El aislamiento de microorgamismos por estría es un método cualitativo mientras que por banco de diluciones es cuantitativo
F
El banco de diluciones es cualitativo porque permite diferenciar distintas morfologías coloniales y cuantitativo porque permite conocer el nº de microo en una suspensión
Aislamiento por banco de diluciones
Consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra en condiciones de esterilidad, de manera que se va reduciendo el nº de microorganismos de la suspensión inicial, con el objeto de sembrar después cantidades conocidas de las diluciones en placas de Petri.
El nº de microorganismos en algunas de las diluciones será tal que al distribuir una parte de ella en una placa originará colonias separadas en un número óptimo para su recuento.
Las diluciones se realizan en tubos que contienen una disolución mineral isotónica (Ringer 1/4) que mantiene la viabilidad de las células pero no permite la división celular. De los tubos se siembra un volumen conocido e (10 a 100 μL), sobre una placa de Petri.
Conociendo el número de colonias (UFC=Unidades Formadoras de Colonias), la cantidad sembrada y la dilución correspondiente, permite evaluar el nº de microorganismos viables en la muestra original.
Cómo se realiza correctamente una estría
Transferir el inóculo a una área reducida de la superficie de la placa, próxima al borde. Extenderlo formando estrías muy juntas sobre la superficie de una porción pequeña de la placa. Para realizar las estrías oscilar el asa de siembra sobre la superficie del agar mediante un balanceo sucesivo y rápido de la muñeca. No hacer más presión sobre el agar que la debida al propio peso del asa y su mango.
Flamear el asa de nuevo y enfriarla. Rozar una vez con el asa de siembra el final de las estrías realizadas anteriormente y hacer sobre una nueva porción de la placa una segunda tanda de estrías en otra dirección.
Flamear y enfriar el asa. Repetir e la operación pero empezar rozando el final de la segunda tanda de estrías. La nueva serie de estrías no deben tocar ninguna de las series realizadas inicialmente.
Por qué para hacer un recuento de colonias se deben coger placas con entre 30 y 300 colonias?
ya que por encima de 300 el nº es demasiado elevado para hacer un recuento fiable y por debajo de 30 no tiene valor estadístico
Además, los duplicados usados deben presentar menos de un 10% de diferencia
