5.5.2 Flashcards
Mycobacterie condition d’incubation
Mycobacterie pathogène= 2-6 semaine d’incubation
Temp de génération plus que 12h (tuberculosis 20-22h)
Incubation:5-10% CO2
Aérobie strict
PH:6,5-6,8
Augmenter humidité incubateur
Mycobacterium coloration
Ne pas utiliser coloration de gram(haute teneur en lipide de paroie entraîne absorption irrégularité du colorant et a l’air de B+)
Utiliser coloration acido- alcoolique conventionnelle (Ziehl Neelsrn, Kinyoun)
Coloration
ZN
3 étape:
Coloration à chaud avec carbolfuchsine
Décoloration
Contre coloration: bleu de méthylène
Coloration Auramine-rhodamine (fluo)
Utiliser uv
Plus sensible que coloration à carbolfuchsine
Tache positif révèle des B jaune orange brillant
Ça se lier à la parois
Mycobacterium
Milieux de culture
Solide:à base d’œuf ou d’agar
Liquide: un bouillon
Milieux d’isolation idéal
Milieu à base d’œuf Lowenstein-Jensen
Sélectif: vert de malachite (inhibe flore normal)
Amidon, glycérol et œuf neutralise composé toxique(apporte nutriment essentiel)
Milieux base d’agar-middlebrook 7H10 et 7H11
Enrichie avec OADC: acide oléique- albumine- dextrose-catalase
Enzyme catalase permet la destruction des peroxyde toxique
Peut avoir des antibiotique et antifongique
Lecture 5-7 jours 1 fois par semaine pendant 8 semaine
Milieux base d’agar-middlebrook 7H10 et 7H11
Bactérie non chromogène
Blanche, crème
Milieux base d’agar-middlebrook 7H10 et 7H11
Mycobacterie chromogène
Jaune, citron, orange, rouge
Bouillon middlebrook 7H9
Contient indicateur
Contient antimicrobien pour réduire contamination
Incubée CO2 pas obligatoire
Pas voir morpho ou pigmentation
Dépôt granuleux rose magenta=croissance
Confirmer avec microscopie et test biochimique
Mycoplasma tuberculosis
Moyen diagnostic: nouvelle technique
PCR
Ne nécessite pas culture bactérie
Accumulation niacine
Recherche présence de niacine ou acide nicotinique
« toute les mycobacterie produise niacine mais tuberculosis accumule un excès»
Excès se retrouve dans milieux de culture
Accumulation de la niacine
Test sur bandelette
Niacine détectée par addition de 10% bromure de cyanogene et 4% aniline dans suspension 96% éthanol
« Va former couleur jaune»
Réduction des nitrate
Production de nitroreductase
- catalyse la réduction de nitrate en nitrite
- ajout acide hydroclorique, sulfonamide et N-naphtylenediamine dihydrochlorique
« Test négatif doit être confirmé avec ajout de zinc, vrai négatif va être rose»
Production dune catalase semi- quantitatif
Ajout de tween 80(détergent) et peroxyde d’ hydrogène
Réaction après 5 min
Mesurée la colonne de bulle
« Plus ou moins de 45mm»
Utilisation de fer
Convertir le citrate d’ammonium ferrique en oxyde de fer
Après apparition de croissance sur un millieu à base d’œuf
Colonie brun rouille à l’ajout d’une solution de citrate d’ammonium ferrique 20%= positif
Résultat absorption de fer
Pyrazinamide
Enzyme pyrazinamidase hydrolyse pyrazinamide
- ammoniaque et acide pyrazionique détecter avec ajout de sulfate d’ammonium ferrique
Positif =annaux rose
Réduction tellurite
Réduction de tellurite de potassium
Les mycobacterie croissance rapide réduisent la tellurite en 3 jours
Urease
Bouillon d’urée est inoculé
Résultat positif après 3 jours: rose
M. Tuberculosis devrais être testé pour sensibiliser à quel antibiotique
Isoniazide
Rifampin
Ethambutol
Streptomycine
Pyrazinamide
Utiliser 2 méthode: sensibilité sur milieux de culture et sensibilité moléculaire
