Форма и размери - микроскопия Flashcards
За какво се използва светлинна микроскопия
за наблюдения на форма и размери на клетката
- 3D изображение
Разделителна способност на светлинна и електронна микроскопия
светлинна - 2 µm
електронна - 0.2 нанометра, 2 ангстрьома
Видове светлинна микроскопия
- светло полева
- флуоресцентна
- фазово-контрастна
- тъмно полева
- диференциално интерферентна контрастна
- конфокална сканираща лазерна с флуоресценция
Видове електронна микроскопия
- трансмисионна електронна - ТЕМ
- сканираща електронна -SEM
За какво се използва ТЕМ?
- клетъчни ултрастуктури
За какво се използва SEM?
- триизмерни микрогрфии
- дължина, ширина, дълбочина
- повърхност на клетките и повърхностни структури
Основна система от лещи на светлинен микроскоп в светло поле
- обектив и окуляр
Принцип на светлинна микроскопия в светло поле
- създава се контраст между обекта и околната среда
- източникът на контраст са фотони от видимата област на светлината
- кондензаторът насочва светлината върху предмета
Електронна микроскопия: принцип
Лещи: електромагнити Източник за създаване на контраст: електрони вместо фотони
Система - под вакуум
- използват се тънки срези - 20-60 нм
- използват се химикали стабилизиращи клетките - злато, уран, лантан, оловни соли, перманганат, осмиева киселина
Увеличение и резолюция на светлинен микроскоп в светло поле
- увеличение до 1000-2000 пъти / увеличението е продукт на лещите в обектива и окуляра и е неограничено
- резолюция 0.2 µm/ функция на дължина на вълната и е ограничено
Оцветяване при светлинен микроскоп в светло поле
- просто и диференциращо на непигментираните бактерии
Светлинна микроскопия в светло поле на пигментирани микроорганизми
- зелени водорасли с хлоропласти (размери: 15 µм)
- пурпурни фототрофни бактерии (размери: 5 µм)
ФКМ - фазово контрастна микроскопия
- наблюдения на живи клетки
- приницип: клетките се различават по индекса на пречупване на светлина, идваща от средата
- приспособленията са фазов пръстен, усилва контраста
- резултатът е тъмно изображение на клетката на светъл фон
- все едно има halo около тях
ТПМ - тъмно-полева микроскопия
- наблюдение на живи клетки
- принцип: светлината достига обекта само отстрани, светлината е отразена от клетката
- резултат: светло изображение на тъмен фон
Флуоресцентна микроскопия
принцип: клетките флуоресцират, защото излъчват светлина в един цвят, след като са абсорбирали светлуна в друг цвят