Zellproliferation Flashcards
Wie ist eine Neubauer-Kammer aufgebaut ?
-> Kammer, in der drei Stege herausgefräst sind
-> Mittelsteg ist 0,1mm niedriger
-> In den Mittelsteg sind Zählnetze eingefräst
Wofür nutzt man eine Neubauer-Kammer und was muss man bei der Nutzung beachten ?
-> Kammer wird zur Zellzählung genutzt
-> Beim Aufsetzen des Deckglases müssen Newton´sche Ringe entstehen
Wie heißen die drei gängigen Zählkammer-Varianten ?
- Bürker-Türk
- Fuchs-Rosenthal
- Schilling
Unter welchen Umständen kann man zur Zellzählung keine Neubauer-Kammer nutzen ?
Bei Überfüllung der Kammer oder Klumpenbildung der Zellen
Was ist ein Coulter-Counter und wie funktioniert er ?
-> 0,4-1200µm großer Partikelzähler
-> Prinzip: Partikel durchströmen in einer Elektrolytlösung unter Spannung eine Messpore. Der Durchfluss eines Partikels ändert den Widerstand proportional zum Partikelvolumen
Was sind die Vor- und Nachteile eines Coulter-Counters ?
- Vorteile:
-> Zellzahl- und Zellgrößendifferenzierung
-> Erfassung von Zellzahl, Zelltrümmern und toten Zellen in einem Ansatz - Nachteile:
-> hoher Anschaffungspreis
-> hohe Zellzahlen notwendig
Definiere die Zellvitalität.
Die Zellvitalität ist der Prozentsatz vitaler Zellen bezogen auf die Gesamtzellzahl einer Zellprobe.
Die Zellvitalität lässt sich über Farb-Ausschluss-Tests prüfen. Welche Farben kann man dafür nutzten ?
- Trypanblau
- Erythrosin B
- Nigrosin
Wie funktioniert ein Farb-Ausschluss-Test ?
- Hydrophiler Farbstoff wird zu den Zellproben gegeben
- In vitale Zellen mit intakter Zellmembran kann der Farbstoff nicht eindringen
- Tote Zellen mit permeabler Zellmembran werden gefärbt
- Zählung der gefärbten bzw. ungefärbten Zellen in einer Zählkammer
Wie funktionieren Enzymtests und wofür werden sie eingesetzt ?
-> Prinzip: Substrat wird zu den Zellen gegeben; Stoffwechselprodukt wird über eine Farbreaktion gemessen
-> Kann als Vitalitätstest und zur Bestimmung der Zellzahl genutzt werden
Nenne fünf Bespiele für Enzymtests.
- Calcein-AM
- MTT-Test
- Sure Phosphatase-Assay
- Hexosaminidase
- Lactatdehydrogenase
Wie lässt sich die Zell-Proliferation mittels 3H-Einbau messen ?
-> Zu den Zellen werden radioaktiv gelabelte Nukleotide (3H-Thymidin) gegeben
-> Es wird der Einbau der gelabelten Nukleotide während der Zellteilung mittels Beta-Counter gemessen
Welche Nachteile hat die Messung der Proliferation mittels 3H-Einbau ?
-> Verwendung von Radioaktivität
-> keine Einzelzellbestimmung
-> wenig Kombinationsmöglichkeiten mit anderen Zellfärbungen
Wie lässt sich die Zell-Proliferation mittels BrDU messen ?
-> BrDU ist ein synthetisches Nukleosidanalog, das statt Thymidin in die DNA eingebaut werden kann
-> Alle Zellen in der S-Phase bauen BrDU ein
-> Nach Denaturierung der DNA kann BrDU über eine Antikörper-Reaktion erkannt werden
Wie lässt sich die Zell-Proliferation mittels CFSE messen ?
-> CFSE ist ein fluorophorer Ester, der stabile Moleküle innerhalb der Zelle bindet
-> Auswertung erfolgt über Durchflusszytometrie
-> Zellteilung kann durch die Halbierung der Fluoreszenzintensität detektiert werden
