Proteinanalytik

Question 1

Nenne eine qualitative Methode der Proteinanalyse.

Answer 1

Immunfluoreszenz

Question 2

Nenne eine semi-quantitative Methode der Proteinanalyse.

Answer 2

Western-Blot + Densitometrie

Question 3

Nenne eine quantitative Methode der Proteinanalyse.

Answer 3

ELISA

Question 4

Es gibt fünf verschieden Antikörper-Klassen. Welche sind das und worin unterscheiden sie sich ?

Answer 4

1. IgA
2. IgD
3. IgE
4. IgG
5. IgM

-> Klassen unterscheiden sich in den schweren Ketten

Question 5

Wie sind die meisten Antikörper aufgebaut ?

Answer 5

-> Bestehen aus zwei identischen schweren und zwei identischen leichten Ketten

-> Schwere und leichte Ketten sind über Disulfidbrücken verbunden

-> Jede Kette hat eine konstante und eine variable Region

Question 6

Was passiert mit Antikörpern durch die Spaltung mit Papain ?

Answer 6

-> Spaltung in zwei Fragmente

-> Fc-Fragment mit konstanter Region

-> Fab-Fragment mit hypervariabler Region

Question 7

Welche Funktionen hat die variable Region eines Antikörpers ?

Answer 7

-> Erkennung des Antigens

-> Spezifität des Antikörpers

Question 8

Welche Funktionen hat die konstante Region eines Antikörpers ?

Answer 8

-> Bestimmung der Ig-Klassenzugehörigkeit

-> Bindung von Fc-Rezeptoren auf B-Zellen und Makrophagen

-> Aktivierung des Komplementsystems

Question 9

Nenne die drei Bestandteile des HAT-Mediums und deren Funktion.

Answer 9

1. Hypoxanthin:
   -> Kann in Guanin und Adenin umgewandelt werden
2. Aminopterin:
   -> Hemmt die Dihydrofolat-Reduktase
   -> Verhindert Synthese von ATP, GTP und TTP
3. Thymidin:
   -> Kann zu TTP verstoffwechselt werden

Question 10

Nenne zwei Vorteile polyklonaler Antikörper.

Answer 10

-> Höhere Affinität durch Erkennung multipler Epitope

-> Weniger anfällig für Veränderungen im Epitop

Question 11

Nenne zwei Nachteile polyklonaler Antikörper.

Answer 11

-> Eher unspezifische Bindung

-> Nachproduktion ist eingeschränkt möglich und teuer

Question 12

Nenne zwei Vorteile monoklonaler Antikörper.

Answer 12

-> Sehr spezifische Bindung

-> Einfache Nachproduktion bei gleicher Qualität

Question 13

Nenne zwei Nachteile monoklonaler Antikörper.

Answer 13

-> Nur für Maus und Ratte etabliert

-> Gefahr falsch negativer Ergebnisse

Question 14

Was unterscheidet direkte von indirekter Immunfluoreszenz ?

Answer 14

-> Bei direkter Immunfluoreszenz bindet der fluorophor-markierte Antikörper direkt an das Antigen

-> Bei indirekter Immunfluoreszenz bindet der fluorophor-markierte Antikörper (Sekundär-Antikörper) an einen Primär-Antikörper, der wiederum das Antigen bindet

Question 15

Nenne zwei Vorteile direkter Immunfluoreszenz.

Answer 15

-> Kurze und einfache Durchführung

-> Weniger unspezifische Bindung

Question 16

Nenne drei Nachteile direkter Immunfluoreszenz.

Answer 16

-> Geringe Flexibilität

-> Hohe Kosten

-> Schwächeres Signal

Question 17

Nenne zwei Nachteile indirekter Immunfluoreszenz.

Answer 17

-> lang dauernde Durchführung

-> Mehr unspezifische Bindung

Question 18

Nenne drei Vorteile indirekter Immunfluoreszenz.

Answer 18

-> Sekundäre Antikörper sind günstiger

-> Verstärktes Signal

-> Mehr Flexibilität

Question 19

Welche vier Unterkatogorien der ELISA-Methode gibt es ?

Answer 19

1. Direkter ELISA
2. Indirekter ELISA
3. Sandwich-ELISA
4. Kompetitiver ELISA

Question 20

Wofür wird der Western-Blot genutzt ?

Answer 20

Bestimmung der Konzentration spezifischer Proteine in Zelllysaten