Va Flashcards
En ácidos nucleicos para la cuantificación y determinación de La pureza qué hacemos..
Espectrofotometria
En ácidos nucleicos para la cuantificación y determinación de La pureza qué hacemos..
Esoectrofotometria
Cuando queremos purificar esos nucleicos cuáles son los diferentes o tipos de mecanismos que usamos..
Cromatografía de afinidad
Electroforesis
Capaz de inactivar ARN asas y ADN asas..
Proteínas K
Capaz de inactivar ARN asas y ADN asas..
Proteínas K
Se encarga de destruir proteínas que creen un enlace con el ADN por ejemplo histonas factores de transcripción y polimerasas…
Proteínas K
Cómo se activa la proteína k?
Bajo condiciones de desnaturalización
En El Paso 3 precipitación de proteínas donde se encuentra el ADN??
En el sobrenadante
Detergente ni único para romper membranas proveniendo la liberación del ADN??
SDs 1%
Buffet para mantener el pH en el cual el ADN se mantiene estable y con carga negativa….
50 mM Tris -HCk pH 8
Cómo se hace la extracción de la ARM
Método fenol cloroformo
Cómo se hace la extracción de la ARM
Método fenol cloroformo
El ADN es más polar que el ARN???
Verdadera
El ADN es más polar que el ARN???
Verdadera
La pureza de 1.8 a 2 de ADN se considera..
Optima
Rango que se considera aceptable de ADN pureza..
1.6-1.8
Rango que se considera aceptable de ADN pureza..
1.6-1.8
Contaminación con compuestos aromáticos y proteínas La pureza del ADN está prox
Menor de 1.6
Contaminación de la ARN
Se da cuandk está la lurezamauor de 2.1
Contaminación de la ARN
Se da cuandk está la lurezamauor de 2.1
Concentración de agarosa típica
0.6% a 4%
La movilidad de la base a la concentración de garosa la movilidad disminuye o aumenta al aumentar el porcentaje de agarosa??
Si
Cuál es el voltaje aplicado en la electroforesis???
100 v a 130v
Cuál es el voltaje aplicado en la electroforesis???
100 v a 130v
Simplemente el voltaje de la electroforesis..
La movilidad aumenta aunque no necesariamente se incrementa la resolución
La mayor tiempo de corrida..
Mayor resolución
Al incrementar la temperatura de la electróforesis..
La movida se incrementa Pero puede incrementar que se puede fundir el gel
Qué hace el bromuro de etirdio??
Absorbe de 260-360 nm
Se intercala en las bases para la visualización de ácidos nucleicos ??
Bromuro de etidio
Se intercala en las bases para la visualización de ácidos nucleicos ??
Bromuro de etidio
Cómo es el proceso de lavado en la extracción del ADN??
Se lava un par de veces de etanol al 75%
✓ Remueve sales y otras impurezas sin disolver en el ADN
Cuál es el coeficiente para la buscarle en concentración impureza del ADN??
Coeficiente 260/280
Cuál es el coeficiente para la buscarle en concentración impureza del ADN??
Coeficiente 260/280
Pero una mejor resolución del voltaje aplicado en la electroforesis se usa…
5v / cm del gel
Es decir 70v
Dónde se utilizaba la electroforesis capilar??
Empleado en secuenciación automatizada
Se basa en la interacción de ácidos nucleicos y proteínas??
EMSA electroforesis
Para la separación de grandes fragmentos de ADN reorienta la molécula mediante cambios periódicos en la orientación del campo eléctrico?? E 1 y E2
Electroforesis de campo claro
Para la separación de grandes fragmentos de ADN reorienta la molécula mediante cambios periódicos en la orientación del campo eléctrico?? E 1 y E2
Electroforesis de campo claro
Qué contiene el buffer de lisis??
✓50 mM Tris-HCl pH 8
✓1% de SDS
✓proteasa K
Qué contiene el buffer de lisis??
✓50 mM Tris-HCl pH 8
✓1% de SDS
✓proteasa K
La precipitación de proteínas se hace con soluciones de..
Acetona
La precipitación de proteínas se hace con soluciones de..
Acetona
Que si le agrega para una precipitación del ADN??
Alta concentración de sales NaCl
Que si le agrega para una precipitación del ADN??
Alta concentración de sales NaCl
Pasos para la extracción de ADN genómico??
- Muestra de células
- Añadir el buffer de lis para mantener el oh, rompoer membranas, desnaturalizar y degradar proteínas
- Precipitar proteínas
- Precipitación del ADn con alcohol frio y alta concentración de sal
5.lavados. - Resuspension de agua libre de nucleasas
- Cuantificación y determinación de la pureza
Pasos para la extracción de ADN genómico??
- Muestra de células
- Añadir el buffer de lis para mantener el oh, rompoer membranas, desnaturalizar y degradar proteínas
- Precipitar proteínas
- Precipitación del ADn con alcohol frio y alta concentración de sal
5.lavados. - Resuspension de agua libre de nucleasas
- Cuantificación y determinación de la pureza
Qué alcohol se utiliza para la extracción del ARN??
Se utiliza el isopropanol que es un alcohol menos polar que el etanol
Qué alcohol se utiliza para la extracción del ARN??
Se utiliza el isopropanol que es un alcohol menos polar que el etanol
Qué Rango no puede ser observado en los genes de agorosa en la electroforesis en gel??
20 pb
Qué Rango no puede ser observado en los genes de agorosa en la electroforesis en gel??
20 pb
Cuál es la concentración normal o típica de agarosa??
0.5 a 4%
Se encarga de detectar hasta 1 Ng de dsDNA??
Bromuro de. Etidio
Se encarga de detectar hasta 1 Ng de dsDNA??
Bromuro de. Etidio
Este es un agente no intercalante que es una alternativa menos tóxica y menos sensible para la visualización de ácidos nucleicos??
SYBR
Entonces en conclusión para lograr una mayor resolución se emplea un voltaje_________ un tiempo de corrida________ y una cantidad _______de porcentaje de agarosa
Menor
Mayor
Mayor
Entonces en conclusión para lograr una mayor resolución se emplea un voltaje_________ un tiempo de corrida________ y una cantidad _______de porcentaje de agarosa
Menor
Mayor
Mayor
En el campo pulsado Las cadenas más cortas les toma mayor tiempo de reorientación exhiben una menor movilidad??
FALSO
A las cadenas más cortas les toma menos tiempo de reventarse y exhiben una mayor movilidad
En el campo pulsado Las cadenas más cortas les toma mayor tiempo de reorientación exhiben una menor movilidad??
FALSO
A las cadenas más cortas les toma menos tiempo de reventarse y exhiben una mayor movilidad
