Purificación Flashcards
Que diferencias se aprovechan en la cromatografía??
Coeficiente de partición entre la fase móvil y una fase estacionaria
Es el coeficiente entre las concentraciones de una sustancia en las dos fases formadas por dos disoluciones invisibles en equilibrio
Coeficiente de partición
Es el coeficiente entre las concentraciones de una sustancia en las dos fases formadas por dos disoluciones invisibles en equilibrio
Coeficiente de partición
Que es retención ??
Es el efecto producido sobre los componentes de una mezcla por una fase estacionaria que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido
Que es retención ??
Es el efecto producido sobre los componentes de una mezcla por una fase estacionaria que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido
Quién realiza el desplazamiento en la cromatografía??
La fase móvil o el oyente que puede ser un líquido o un gas
Es la acción de migración de los componentes de una mezcla retenidos a lo largo de una fase estacionaria impulsados por el desplazamiento ejercido de la fase móvil…
Elicion /eluir
Tipo de cromatografía para aminoácidos individuales o dipéptidos
Cromatografía en papel
Tipo de cromatografía para aminoácidos individuales o dipéptidos
Cromatografía en papel
Los más usados de esta cromatografía es la sílica gel ( siO2) y aluminia (Al2O3)
Los más usados de esta cromatografía es la sílica gel ( siO2) y aluminia (Al2O3)
Cuál es la fase estacionaria de la cromatografía en columna???
El gel sílica o alumina
Cuál es la fase estacionaria de la cromatografía en columna???
El gel sílica o alumina
Cómo se eluyen las muestras en la cromatografía en columna???
Va a través de las moléculas más polares van rápidamente a través de las columnas
Fase estacionaria de la cromatografía de intercambio ionici??
Resuna
Fase estacionaria de la cromatografía de intercambio ionici??
Resuna
Cómo se da la cromatografía de intercambio iónico???
Se aprovechan las diferentes signos y magnitudes de las cargas de las moléculas conforme a las proteínas a distintos PH s
Cuál es la fase estacionaria de la cromatografía de exclusión molecular??
Material poroso inerte
Cuál es la fase estacionaria de la cromatografía de exclusión molecular??
Material poroso inerte
Esta cromatografía separa el soluto según el tamaño y estructura molecular
Cromatografía de exclusión molecular
Esta cromatografía separa el soluto según el tamaño y estructura molecular
Cromatografía de exclusión molecular
En la cromatografía de exclusión molecular estas moléculas entran en el laberinto de los espacios dentro de la matriz y son retrasadas
Moléculas pequeñas
En la cromatografía de exclusión molecular estas moléculas entran en el laberinto de los espacios dentro de la matriz y son retrasadas
Moléculas pequeñas
Conocida como la cromatografía con mayor especificidad y selectividad para purificación de biomoléculas
Cromatografía de afinidad
Ejemplos de cromatografía de afinidad??
✓antigeno / antígeno
✓enzima/sustrato
✓receptor/ ligando
Cuál es la parte en la cromatografía de afinidad que se queda o tarda más en salir??
Se quedan retenidas las moléculas con la afinidad por la fase estacionaria
Ahora una vez que las moléculas de la cromatografía por afinidad se quedan en la fase estacionaria retenidas que debo de hacer…
Se liberan mediante un cambio del medio diluyente a condiciones en la que la interacción se debilite
Por ejemplo:
pH
Fuerza iónica
Polaridad
Solución de moléculas inmovilizadas
En qué se basa La cromatografía líquida de alto rendimiento??
Se basa en liquido-liquido
–>Hace uso de bombas de alta presión para mover las moléculas a través de la columna
Una de las herramientas moleculares fundamentales para aislar y purificar macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
Electrophoressis
Una de las herramientas moleculares fundamentales para aislar y purificar macromoléculas en base a su movilidad dentro de un soporte o matriz sólida en un campo eléctrico
Electrophoressis
Tipos de muestras que pueden ser analizados en la electroforesis??
*ácidos nucleicos 🧬
*proteínas 🔵🔵
Gel más utilizado en la electroforesis para proteínas??
Geles de poliacrilamida
Gel más utilizado en la electroforesis para proteínas??
Geles de poliacrilamida
La movilidad de una molécula en la electroforética se va a dar en relación con:
Con el peso molecular y su carga
Los cationes se mueven al ánodo y los aniones se mueven al cátodo???
Falso
Los cationes se mueven hacia el cátodo y los aniones se mueven hacia el ánodo
Factores extrínsecos a la molécula en la movilidad electroforética??
Concentración del gel
Voltaje aplicado
Tiempo de corrida
Temperatura
Factores extrínsecos a la molécula en la movilidad electroforética??
Concentración del gel
Voltaje aplicado
Tiempo de corrida
Temperatura
Cuáles son los factores intrínsecos en la movilidad de la electroforética???
Carga eléctrica
Peso molecular
Si la relación carga eléctrica peso molecular es constante como el de ácidos nucleicos la movilidad se da en::
En relación de la función de su peso molecular
—>a mayor peso molecular menor movilidad
—>a menor peso molecular mayor movilidad
Las proteínas que tienen mayor movilidad???
Proteinad globulares
Proporciona el poli de una carga negativa que resulta proporcional a la longitud de la cadena por tanto el peso molecular??
SDS
Una molécula de SDS por:
Cada 2 residuos de aminoácidos
Una molécula de SDS por:
Cada 2 residuos de aminoácidos
Que hace SDS sobre la estructura proteínica???
✓ agente desnaturalizante
✓elimina diferencias en la confirmación y su influencia sobre la movilidad de diferentes proteínas que han de ser separadas por gel
Cuál es la solución de que el corrimiento electroforético observado puede representar a más de una cadena polipeptídica…
La solución puede ser emplear agentes desnaturalizantes reductores
Es un agente desnaturalizante reductor…
Ditiotrenol (DTT) O B- mercaptoetanol
Cómo ayuda un desnaturalizante reductor en la electroforesis de proteínas….
Puede terminar el número y el tamaño de subunidades proteínicas bajo condiciones reductoras y no reductoras
Cómo ayuda un desnaturalizante reductor en la electroforesis de proteínas….
Puede terminar el número y el tamaño de subunidades proteínicas bajo condiciones reductoras y no reductoras
Que hace el azul de bromofenol??
Se adiciona al buffer de carga y ayuda a controlar que no salgan del gel las corridas
Que hace el azul de bromofenol??
Se adiciona al buffer de carga y ayuda a controlar que no salgan del gel las corridas
Tiene una carga negativa por encima de pH: 4.6 y un peso molecular menor que cualquier proteína ???
Azul de bromofenol
Electroforesis que se da por la separación por punto isoelectrico ( isoelectroenfoque)
1er dimensión
Electroforesis que se da por la separación por punto isoelectrico ( isoelectroenfoque)
1er dimensión
Electroforesis que se da por separación por tamaño ( peso molecular )
2da dimensión
Que es un polianfolitos?
Son moléculas grandes como proteínas que tienen muchos grupos acodis o básicos (ionizables/protonables)
El punto isoelectronico bajo indica ____&&
Predominancia de grupos ácidos
Punto isoelectronico alto indica _____
Predominancia de grupos básicos
Cuáles son los geles de poliacrilamida??
•Acrilamida -> formación de polímeros
•Bisacrilamida -> entrecruzamiento entre cadenas de polímeros
Cuáles son los geles de poliacrilamida??
•Acrilamida -> formación de polímeros
•Bisacrilamida -> entrecruzamiento entre cadenas de polímeros
