Unidad III: ADN Recombinante Flashcards
¿Que es el ADN recombinante?
Molécula de ADN formada de manera deliberada in vitro por la unión de secuencias de ADN provenientes de dos organismos de especies diferentes que normalmente no se encuentran juntos.
¿Que es la tecnología de ADN recombinante?
Es un conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente.
Protocolo básico de produccion de ADN recombinante
Caracterización del gen de interés:
**secuencia
**proteína que codifica
**propiedades
Clonación del gen de interés
**Amplificación por PCR.
**Inserción a un vector / almacenamiento en genotecas.
Inserción en el organismo blanco (microorganismo, planta, animal… ).
Aplicaciones de la tecnología de ADN recombinante
Producción de medicamentos y vacunas
Mejoramiento genético de plantas y animales (transgénicos).
Producción de metabolitos de interés industrial.
Gen
Secuencia específica de nucleótidos del ADN, que contiene la información necesaria para la síntesis de una proteína o algún tipo de ARN.
Locus
ubicación específica de cada gen en un cromosoma,
(plural: loci).
Genotipo
Composición genética de un organismo
en su totalidad.
**Varía según los alelos que tiene cada
individuo.
fenotipo
Son las características físicas de un individuo.
Alelos:
son formas alternativas de un gen que se hallan en el mismo locus de cromosomas homólogos.
** Se dividen en la meiosis
**El hijo recibe uno de cada progenitor
Tipos de alelos
Alelos homocigotos: alelos idénticos.
Alelos heterocigotos: alelos diferentes.
Alelo dominante: alelo cuyo efecto sobre
un rasgo enmascara el efecto de su par
Alelo recesivo: alelo cuyo efecto es
enmascarado por el dominante.
Cromosomas homólogos:
Cromosomas que forman un par y se pueden recombinar durante la meiosis.
**Mismos loci, alelos diferentes
**Se encuentran en celulas diploides
Tipos de mapas
Mapa genético: indica una región del
cromosoma donde se encuentra un rasgo o característica del organismo (alelo).
Mapa físico: ubican a los genes de una forma específica dentro del cromosoma.
Técnicas de ADN Recombinante
Técnicas para identificar, aislar y unir secuencias de ADN de especies diferentes.
**Ing. Genética: la utiliza para clonar genes de un organismo e introducirlos en otro distinto.
Enzimas de Restricción
Es una proteína cuya función es cortar el ADN en una secuencia específica
**deja extremos cohesivos o romos en la secuencia de ADN
Ligasa de ADN
Enzima (proteína) que une secuencias de ADN complementarios.
Vector de clonación
Es una molécula de ADN que lleva ADN externo a células hospederas (células que reciben el ADN), para generar un organismo transgénico.
Esto ocurre al replicar fragmentos de ADN que llevan insertados.
Características de un vector de clonación
*La molécula es capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta.
* El vector y el fragmento de ADN se tratan con una endonucleasa (enzima) de restricción, para posteriormente mezclarlos y ligarlos usando una ADN Ligasa.
Elementos esenciales de los vectores de clonación
- Tiene su propio origen de replicación
- Tienen un sitio de clonación múltiple
- Poseen marcadores genéticos coleccionables
Pasos para obtención de plantas transgénicas
- Aislar el gen de interés.
- Clonar el gen en un plásmido.
- Transferirlo a Agrobacterium tumefasciens.
- Transformar tejido vegetal.
- Regenerar plantas completas mediante cultivo de tejidos vegetales.
¿Que es una genoteca?
Colección de clonas, cada una de las cuales contiene un vector al que se le ha insertado un fragmento de ADN derivado del ADN/ ARN total de una célula o tejido.
Finalidad de las genotecas
*Aislamiento de secuencias y genes: punto de partida para el estudio molecular.
*Conservación del genoma de estudio (restos arqueológicos, especies en extinción,
individuos con patologías únicas).
*Estudio de la secuencia genómica: conocer la secuencia completa de un genoma implica su clonación previa.
genotecas de ADN genómico
*Colección de clonas que representan (entre todas) el genoma completo de un organismo
*Se digiere el ADN con enzima de restricción.
**Clonación en vector e introducir en bacteria.
Genoteca ADNc
*A partir de ARN, se extrae ARN.
*Representa solo los genes que se expresan en un momento bajo una condición o tratamiento determinado.
*No hay digestión, las moléculas de ARNm ya tienen un tamaño definido.
*Se realiza Transcripción reversa para obtener cDNA.
**Clonación en vector e introducir en bacteria.
Cósmidos
- Vectores híbridos con partes del cromosoma de un fago y de plásmidos.
- Los cósmidos pueden transportar hasta 50 kb de ADN insertado.
Contienen: - Secuencia cos del fago λ, necesaria para el empaquetamiento del ADN del fago dentro de su cubierta proteica.
- Secuencias plasmídicas necesarias para la replicación y genes de resistencia a antibióticos.