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Biotechnologie des cellules eucaryotes > Type de culture cellulaire végétale > Flashcards

Type de culture cellulaire végétale Flashcards

1
Q

quels sont les techniques de culture de tissus végétaux?

A
  • Micropropagation
  • Culture de cals
  • Organogenèse
  • Embryogenèse somatique et zygotique
  • Culture d’anthers et d’ovules
  • Culture de protoplastes
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2
Q

c’est quoi la totipotence?

A
  • Capacité d’une cellule de se différencier en n’importe quels types de cellule spécialisée et former éventuellement un être vivant multicellulaire.
  • En principe, toute cellule végétale est totipotente et
    donc capable de régénérer une plante entière.
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3
Q

quesl sont le 3 types de culture in vitro de plantes?

A

Organisée:
* embryon, graine, organe

Non organisée:
induite par l’utilisation de fortes concentrations d’hormones
* Amas de cellules (cals),

Organisée/Non organisée:
isolées d’organes organisés, qui se dédifférencient pour former des tissus non différenciés

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4
Q

qu’elles sont les facteurs influencent la capacité à régénérer des tissus à considéré lors du choix de l’explant?

A

▪ Génotype → monocotylédones plus difficile que les dicotylédones
▪ Physiologie (dormance vs floraison) / santé
▪ Position (topophysie)
▪ Âge (cyclophysie)→ plus le tissu est jeune, plus il sera facile de le dédifférencier et le redifférencier
▪ Conditions de croissance
▪ Taille
▪ Méthode d’inoculation

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5
Q

Comment préparer nos explants ?

A
  1. couper des bouts
  2. EtOH 70-95% 2 minutes
  3. Javel 0,5-1% et tween 20 5-20 minutes
  4. eau stérile au moins 3x
  5. déposer sur notre milieu de culture

** manipulation sous la flamme.

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6
Q

Pourquoi utiliser un milieu de culture cellulaire dure?

A

Présence d’agar* (0,6 -0,8%) ou d’agarose

Croissance plus lente qu’en liquide

Gradients de concentration possibles

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7
Q

pourquoi utiliser un milieu de culture cellulaire liquide?

A

Meilleur contact, croissance plus rapide, mais conditions
« artificielles »

Agitation requise +aération; - agrégation

Milieu = 20-30% du volume du flacon

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8
Q

que doit ton avoir au minimum dans nos milieu de culture de cellule végétal?

A

▪ Eau pure
▪ Macro-éléments: N, P, K, Ca, Mg, S
▪ Micro-éléments: Fe, Zn, B, Mn, Cu, Co, Ni, Al, Mo, I etc.
→ toxiques à trop grandesconcentrations
▪ Source de carbone

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9
Q

quel aditif sont important pour nos milieu de culture de cellule végétal?

A

▪ Régulateurs de croissance → HORMONES
▪ Vitamines (Groupe B et autres)
▪source d’azote
→ ajout tampons
▪ pH optimal = 5.0-6.0
▪ pH<4,5 ou > 7.5 → arrêt de croissance

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10
Q

qu’elle est le milieu de culture cellulaire végétal le plus utilisé?

A

MS: Murashige and Skoog

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11
Q

quelles sont les étape de la micropropagation?

A
  • Prélèvement de l’explant et mise en culture (asepsie)
  • Mise en culture: milieu stérile
  • Croissance et développement in vitro
  • Formation des racines
  • Acclimatation
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12
Q

comment faire de la boutures à nœud simple?

A
  1. prélever un bourgeon
  2. mise en culture
  3. formation de tige
  4. prélever les bourgeons
  5. mise en culture des new bourgeons
  6. avoir des tiges
  7. dévevloppement en serre
  8. mise en terre
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13
Q

comment faire de la bouture avec des bourgeons auxillaire?

A

on isole l’extrémité de la pousse avec le bourgeon et on ajoute des cytokines.

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14
Q

pourquoi choisir la méthode de micropropagation?

A

▪ plus rapide / bon rendement
▪ peu de matériel végétal nécessaire
▪ économie d’espace
▪ plantes sans maladie
▪ clonage d’espèces impossibles à bouturer in vivo
▪ propagation de plantes uniques

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15
Q

quels sont les désavantage d’utiliser la micropropagation?

A

▪ instabilité génétique
▪ difficultés d’enracinement
▪ difficiles avec arbres matures
▪ difficultés d’acclimatation
▪ population identique / monoclonale
▪ régénération parfois difficile
▪ stérilisation parfois incomplète
▪ assez coûteux

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16
Q

quel paramètre est-il important de contrôler lors de la formation de cals?

A

une balance hormonale précise d’auxines/cytokinines.

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17
Q

Comment faire la production de cals en suspensions cellulaires?

A
  1. stéréliser l’explant
  2. mettre sur un milieu solide
  3. culture de cals
  4. milieu liquide
  5. Filtrer, décante et addition de pectinase
  6. remettre en milieu liquide
18
Q

que sont les métabolite secondaire lors de la culture de cals?

A

substance produite par métabolisme secondaire généralement non essentielle à la croissance de la plante mais utile pour certains processus

19
Q

quels sont les avantages à faire la culture de cals?

A

▪ Clonage d’espèces impossibles à bouturer in vivo
▪ Peut être cryo-préservé
▪ Économie d’espace
▪ Possible avec quasiment toutes les espèces végétales
▪ Propagation de plantes uniques

20
Q

quels sont les désavantages à faire la culture de cals?

A

▪ Population identique / monoclonale
▪ Régénération parfois difficile
▪ Stérilisation parfois incomplète
▪ Assez coûteux (

21
Q

c’est quoi l’organogenèse?

A

L’organogenèse est un ensemble de transformations tissulaires qui aboutissent à la formation des différentes organes

22
Q

quel sont les facteur contrôlant l’organogenèse?

A

l’auxine:
formation de racine adventive

cytokinine:
formation de repousse adventive

23
Q

c’est quoi un embyon somatique?

A

▪ Origine unicellulaire, puis segmentation en pro-embryon
▪ Développement similaire à l’embryon zygotique
(A) globulaire
(B) cordiforme
(C) torpille
(D) cotylédonaire
▪ Pas de graine formée
▪ Même génotype que la cellule initiale

24
Q

c’est quoi l’embryogenèse somatique?

A

embryon somatique obtenus à partir de cellules non sexuées (sans fécondation)

25
Q

que sont les deux type d’embryogenèse somatique?

A

direct:
Les embryons sont induits directement à partir des cellules somatiques de l’explant.

indirect:
Passe par l’intermédiaire de cals

26
Q

quels sont le avantages associés aux embryons somatiques?

A
  • productions de centaines/milliers d’embryons à partir du même matériel
  • accélère le cycle de reproduction chez de nombreuses espèces (ex.
    conifères)
  • conservation de génotype à long terme
27
Q

quels sont les problèmes associés aux embryons somatiques?

A
  • formation d’embryons bizarres ou dormants
  • clones identiques
  • variations somaclonales
28
Q

quels sont les utilisation de des embryon somatiques?

A

▪ Cryopréservation
(conservation à long terme)
▪ Transformation génétique
▪ Production de graines artificielles
→ Milliers d’embryons de même génotype
→ Utilisation pratique (requiert un «emballage») = graine

29
Q

c’est quoi un Embryon zygotique?

A
  • embryon issu de la fécondation d’un ovule par un grain de pollen
  • formé par la fusion d’un gamète (n) mâle et d’un gamète femelle
30
Q

pourquoi utilisé un embryon zygotique immature?

A

-Éviter avortement
- Germer des graines de parasites obligatoires
- Croisements interspécifiques
- très difficile

31
Q

pourquoi utilisé un embryon zygotique mature?

A
  • Accélérer la germination
    -absence d’inhibiteur
  • difficile
32
Q

quels sont les étapes de la culture d’embryon zygotique?

A

1) stérilisation : graine ou fruit
2) excision de l’embryon – délicat!
3) inoculation dans milieu solide

33
Q

quels sont les avantages de la culture d’anthers et d’ovules?

A

●production rapide d’homozygotes
●production de lignées hybrides (F1)
●diminution de la ploïdie
●hybridation “somatique” avec protoplaste haploïde
●identification rapide de mutations récessives

34
Q

c’est quoi un protoplaste?

A
  • cellule végétale sans sa paroi cellulaire
  • sphérique,
  • très fragile
35
Q

Comment faire la production de protoplaste?

A
  1. prendre la mésophylle de feuille ou des cals
  2. isolement
  3. purification
  4. évaluation de la viabilité
  5. expérience, modification génétique, culture et régénération
36
Q

comment faire de l’isolation mécanique des protoplaste?

A
  1. la plasmolyse douce
  2. couper les tissus pour relacher les protoplaste
37
Q

à quoi sert les osmoticum lors le l’isolement mécanique des protoplaste?

A

éviter l’éclatement des cellules

38
Q

comment faire l’isolement de protoplaste par digestion enzymatique?

A
  1. pelage de l’épiderme
  2. digestion de la paroi cellulaire
39
Q

comment purifier les protoplates?

A
  1. eliminer les gros débris
  2. centrifuger à basse vitesse et fottaison sur sucre
  3. resuspension dans osmoticum
40
Q

comment faire le test de viabilité des protoplaste?

A

utiliser 2 colorant, un pour le cellule vivant et l’autre pour les cellules mortes.

41
Q

comment utiliser des protoplaste?

A
  • Modifications génétiques
  • Étude sur la régénération de la paroi
  • Études de la membrane / électrophysiologie
  • Isolement des organelles
42
Q

comment regénérer une plante à partir des protoplaste?

A

▪ Régénération de la paroi (très difficile)
▪ Divisions cellulaires (2 à 7 jours après l’isolement )
▪ Formation de cals (1 à 3 semaines)
▪ Organogenèse, embryogenèse somatique

Biotechnologie des cellules eucaryotes (7 decks)

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