Translation/Proteinsyntes

Question 1

Prokaryot ribosom består av två subenheter som bildar ett komplex. Vilka?

Answer 1

• Större subenhet: 50s
• Liten subenhet: 30s
• Hela Ribosomen: 70s

Question 2

Hur bildas Ribosomen?

Answer 2

• Transkription av rRNA-gener (i DNA nukleonen på eukaryoter)
• rRNA veckas –> Binder till ribosomala proteiner
• Bildar 30s och 50s
• (på Eukaryoter transporteras de färdiga subenheterna ut i cytoplasman från cellkärnan, på Prokaryoter finns ingen cellkärna så subenheterna bildas direkt i cytoplasman)

Question 3

Hur går sammanslagningen av Ribosomens subenheterna till?

Answer 3

• IF-3 binder 30s först till mRNA —> P-site
• IF-2 sitter bundet till fMet-tRNA och GTP
• IF-2 tar initierings-tRNA rekryteras till P-sätet
• IF-2 hydrolyserar GTP
• 50s binder in
• Leder till konfromationsändring
• Stabiliserar 70s Ribosomen

Question 4

Vad är IF? Hur inverkar IF-1, IF-2 och IF-3 vid translationen i Prokaryoter?

Answer 4

IF = Initierings-faktor

• IF-3 försäkrar att Ribosomens subenheter binder till tRNA
• IF-3 håller 30S fri från 50S —> hjälper mRNA att positioneras rätt
• IF-2 är GTP-bundet protein som hjälper INITIATOR tRNA TILL P-site fMet-tRNA att binda till P-sätet
• IF-1 Blockerar A-sätet så att tRNA binder till P-sätet (förhindrar Läsramförskjutning)
• När mRNA och initiator tRNA korrekt placerade —> IF-2 hydrolyserar GTP —> 50s binder in

Question 5

Vilken sekvens utgör Startkodonet? Vad är skillnaden på Eurkaryot och Prokaryot translation i detta avseende?

Answer 5

• Startkodon = AUG
• AUG kodar för formyl-Metionin i Prokaryoter
• Eukaryoter har inte och använder inte formyl-Metionin, endast vanligt Metionin

Question 6

Vad är Shine-Dalgarno-sekvens (SD-sekvens)?

Answer 6

• Hjälper ribosomen känna igen rätt startpunkt för translation genom att bespara med 16s rRNA i 30s-subenheten
• Ligger 10 baspar FÖRE startkodonet AUG
• Finns inga sekundärstrukturer vid 3’-änden
• Är då lätt-tillgänglig för Ribosomen
• Kort konserverad nukleotidsekvens i Prokaryot mRNA

Question 7

Hur går aminosyraaktivering till?

Answer 7

• Aminoacyl-tRNA-syntetas ser att binder till specifik Aminosyra
• Bindningen sker genom hydrolys av ATP
• Aminosyra-specifikt tRNA binder till Aminoacyl-tRNA-syntetas
• Enzymet fäster ihop tRNA och aminosyra
• Redo för ribosomen

Question 8

Hur går det till när elongeringsfaktorer, EF, inverkar vid translationen?

Answer 8

• A-sätet tomt
• EF-tu letar upp aminosyra med antikodon som matchar kodonet
• Aminosyran fästs i A-sätet, EF-tu binder GTP, om rätt, hydrolyseras GTP –> Blir då GDP
• EF-ts återaktiverar EF-tu genom att byta GDP till GTP
• EF-tu kan binda ny Aminoacyl-tRNA-syntetas
• EF-G hydrolyserar GTP till GDP ——> Konformationsändring i ribosomen
• Flyttar ribosomen längs mRNA-kedjan efter att peptidbindning bildats
• Kedjan rör sig vidare för translation av nästa kodon

Question 9

Hur bildas peptidbindningen mellan Aminosyra i A-säte och P-säte? Vad är Ribozymer?

Answer 9

• Amino i A-säte gör nukleofil attack Amino på P-säte
• Bildas dipeptid
• Dipeptidbindningen katalyseras av Adenin-grupp i ribosomalt RNA
• rRNA’t har enzymatisk aktivitet = Ribozym

Question 10

Hur går termineringen till?

Answer 10

• Stöter på Stopp-kodon
• Då kan Releasefactor, RF-1 eller RF-2, binda till A-säte
• RF blockerar fler inkommande aminosyror
• Inbindning stimulerar hydrolys av tRNA
• Komplexet lossnar

Question 11

Vad är Wobble hypotesen och varför sker det?

Answer 11

• Tredje basen i kodonet mer flexibel vid translation
• Inosin hos tRNA kan baspara med U, G och A
• Finns 61 kodoner
• Tillåter lite variation i bindningsmönstret
• Utvecklad metod mot missense mutationer