Trabalhos práticos

Question 1

Trabalho 1: Cromatografia de adsorção
- Qual o objetivo?
- Quais são as conclusões? Qual é a ordem de eluição?

Answer 1

• O nosso objetivo era separar o corante azul de metileno e alaranjado de metila através da cromatografia em camada fina e cromatografia em coluna.
• Concluímos que o alaranjado de metilo é menos polar, logo sai primeiro da coluna, tem um Rf maior , logo tem menor afinidade com a fase estacionária.

Question 2

Trabalho 2: Separação de misturas por cromatografia de troca iónica
- Em que consiste este método?
- Qual o objetivo?
- Porquê usamos a resina cationica?
- Em que consiste o volume gasto (branco)?
- O que significa a diferença entre o volume gasto de amostra e o volume gasto no ensaio branco?

Answer 2

• Este método consiste na separação de moléculas ionizáveis tendo em conta a sua carga total, separando moléculas semelhantes de difícil separação.
• O objetivo neste trabalho era determinar a concentração de sulfato inorgânico presente numa amostra de urina por cromatografia de troca iónica seguida de titulação de precipitação.
• Usamos resina catiónica (fase estacionária) para esta captar o sulfato inorgânico por associação a iões bário (catiões).
• O volume (ensaio) branco permite detetar o volume total de iões bário presente em solução.
• A diferença destes volumes permite-nos determinar o volume de iões bário que reagiu com o sulfato.

Question 3

Trabalho 3: Separação de misturas por cromatografia de filtração em gel
- Qual é o objetivo?
- Quais foram as moléculas usadas?
- Qual é a fase móvel e a fase estacionárias?
- Quais são as conclusões?
- O que significa o coeficiente de partição Kav = 0, Kav < 1 e Kav > 1 e Kav = 1 ? Como se calcula?

Answer 3

• O objetivo é a aplicação de um processo cromatográfico para separar moléculas de diferentes dimensões e determinar as massas moleculares relativas das proteínas
• Foram usadas azul de dextrano, citrocomo C e cromato de potássio.
• A fase móvel é NaCl e a fase estacionária é o Shepadex G-75 (Gel com poros na sua matriz)
• Moleculas com grandes dimensões (Azul de dextrano) não conseguem passar pelo tamanho dos poros do gel, logo passam através do líquido presente fora das partículas (volume morto da coluna). Estas saiem primeiro pela coluna, logo o seu tempo de retenção é menor.
• Kav = 0 significa que as moléculas não conseguem penetrar nas partículas do gel; Kav < 1 significa que as moléculas no exterior existem em maior quantidade do que no interior; Kav > 1 significa que as moléculas no exterior existem em menor quantidade do que no interior; Kav = 1 significa que as moléculas encontram-se em igual quantidade no interior e no exterior.
• Kav = (Ve - V0) / (Vt - V0)
  Ve = volume de eluicão/retenção
  V0 = volume morto da coluna (composto que sai primeiro)
  Vt = volume total da coluna (Vt = π.r².h)