Testy diagnostyczne, transplantologia Flashcards
Rodzaje przeszczepów
autologiczny
izogeniczny = syngeniczny
allogeniczny = homologiczny
ksenogeniczny = heterogeniczny
Nadostre odrzucanie przeszczepu
naturalne Ig przeciwko śródbłonkom tkanki przeszczepianej
Mechanizm nadostrego odrzucania przeszczepu
- aktywacja dopełniacza
- migracja makrofagów i płytek
- uruchomienie kaskady krzepnięcia
- embolizacja naczyń
- martwica
Ostre odrzucanie przeszczepu
proces aktywacji odpowiedzi komórkowej
po kilku dniach
Przewlekłe odrzucanie przeszczepu
reakcja mieszana - humoralna i komórkowa cytotoksyczna
trwa latami
Przeszczep przeciwko biorcy GvH
mechanizm oparty na przeszczepie niezgodnych antygenowo komórek immunokompetentnych dawcy do organizmu biorcy, w którym podejmują one aktywację odrzucania całego organizmu biorcy
Precypitacja antygenu
reakcja między rozpuszczalnym antygenem i rozpuszczalnym przeciwciałem, polegająca na tworzeniu swoistego, nierozpuszczalnego kompleksu Ag-Ig, którego efektem jest powstający precypitat (zmętnienie)
Aglutynacja
reakcja w której dochodzi do zlepianie się aglutynogenów (np. krwinek) pod wpływem przeciwciał (aglutynin) skierowanych przeciwko antygenom znajdującym się na ich powierzchni
Miano surowicy = miano przeciwciał w surowicy
odwrotność najwyższego rozcieńczenia surowicy (a więc najniższe stężenie przeciwciała), które wystarcza do wywołania widocznej reakcji aglutynacji
im bardziej rozcieńczone tym wyższe miano
lmmunodyfuzja radialna
- test ilościowy do oznaczania ilości poszczególnych klas immunoglobin w surowicach albo do ilościowego określania składników dopełniacza (białko, hormony)
- mierzenie promienia tworzącego się kręgu precypitacyjnego wokół antygenu
- Ig unieruchomione w żelu, Ag dyfunduje
Test Elisa
- wykorzystuje reakcje enzymatyczne do uwidocznienia reakcji immunologicznej
- oznaczanie cytokinin, kolagenu, przeciwciał
- test ilościowy
Zasada działania testu elisa
przeciwciało związane z określonym enzymem może specyficznie rozpoznawać dane białko wcześniej uruchomione na podłożu;
po dodaniu przeciwciał tworzy się kompleks unieruchomiony;
po opłukaniu i dodaniu substratu dla enzymu (np. zmieniającego kolor) zajdzie reakcja chemiczna świadcząca o obecności danego białka
na podstawie intensywności koloru można dokonać oceny ilościowej
W teście Elisa na wykrycie przeciwciał
stosuje się płytki opłaszczone antygenem
Dwuwartościowość monogamiczna
polega na wiązaniu się dwóch miejsc wiążących antygen pojedynczej immunoglobuliny z dwoma epitopami tego samego antygenu
skutkiem jest brak odczynu precypitacji
Warunki niezbędne do zajścia reakcji precypitacji
- stężenie reagentów - stosunkowo duże (niska czułość testu)
- stężenie elektrolitu indukującego - 0,15 mol NaCl
- pH = 6,4 - 8,5
- czas reakcji do kilku h
- temp. 37 C
- inaktywacja dopełniacza
Odczyny precypitacyjne w środowisku płynnym
precypitacja pierścieniowa
precypitacja szkiełkowa
odczyn flokulacyjny (test kłaczkujący)
Odczyny precypitacyjne w środowisku stałym (immunodyfuzja)
- pojedyncza immunodyfuzja płytkowa, immunodyfuzja radialna
- podwójna immunodyfuzja płytkowa
Podwójna immunodyfuzja radialna
pozwala określić czy antygeny mają identyczne, wspólne czy różne determinanty
określenie stopnia podobieństwa antygenowego białek
Immunoelektroforeza
- łączy w sobie dwie techniki: elektroforezę w żelu i podwójną immunodyfuzję
- badanie mieszaniny białek
Immunoelektroforeza wg metody Scheideggara służy do
badania nieprawidłowości składu białek w płynach biologicznych
ocena na podstawie powstałych łuków precypitacyjnych
Immunoelektroforeza rakietkowa
ilościowa ocena białek
wprost proporcjonalne stężenia do wysokości rakietki
Immunoelektroforeza krzyżowa
- ocena ilościowa antygenu występującego w bardzo małych stężeniach w mieszaninie białek
- duża czułość
- wykrywanie białek nowotworowych, hormonów
Warunki niezbędne do zajścia reakcji aglutynacji
- pH = 6,8 - 7,2
- temperatura - 2-22C dla zimnych aglutynin (IgM), 37C dla ciepłych aglutynin (IgG)
- czas - 15-60 min
- siła jonowa - czym mniejsza tym lepiej aglutyniny łączą się z aglutynogenami
Odczyn lateksowy
wykrywanie przeciwciał przeciwko antygenom rozpuszczalnym
test jakościowy
