Test 1: lab formatif Flashcards
Qui exigent des études et des tests rigoureux de contrôle qualité sur les pharmaceutiques? Pourquoi?
Les agences réglementaires
Évaluer la nature (qte, identité, impureté, intégrité et uniformité) + Que la forme galénique délivre bonne qte de PA
Que teste-t-on chez les comprimés?
Dureté
Friabilité
Désintégration
Avec quelle technique permet l’identification et le dosage? IMP
HPLC avec un standard de référence
À quoi sert l’HPLC?
Séparer
identifier
Quantifier
L’échantillon doit-il est être en poudre pour faire le HPLC?
NON! Il doit être en solution (pharmaceutiques, métabolites etc.)
ON utilise quel type d’HPLC dans notre lab
HPLC en phase inverse
Donne les prérequis pour avoir une bonne courbe standard (5 sur 8)
-On doit utiliser une bonne gramme de concentrations des standards de calibration (LOQ à la concentration maximale à quantifier
-La courbe doit être fraiche du jour
-La courbe dpit avoir 5 points minimum
-Rester dans les limites de sensibilité de l’appareil
-Se situer dans les limites de la courbe
-Mettre en graphique selon l’aire du pic HPLC en fct de la concentration connue du standard de calibration
-Montrer l’équation de la droite, sans faire passer par l’origine
R carré robuste: >0,98
Quel est le métabolite de l’aspirine/ASA suite à une biotransformation
Salicylate (SA)
Comment est formé le SA/Salicylate (Nomme l’autre version NON ENZYMATIQUE)
Par hydrolyse sous différentes conditions: humidité
Qu’est ce que le MBA? On l’utilise pour quoi en lab
Une molécule avec une base structurale s’appartenant à l’ASA et SA.
Il est notre standard interne de quantification
Quelle colonne on utilise dans ce lab pour l’HPLC et dit c’est quoi la phase stationnaire
La colonne Zorbax SB-C18
La phase stationnaire est le Zorbax SB-C18 (colonnne en phase inverse)
Quels sont les phases mobiles utilisées en lab?
Phase mobile A: H2O/TFA 0,1%
Phase mobile B: ACN/TFA 0,1%
Comment on peut voir les pics d’élution chrommatographiques de chaque analyte?
Via le chromatogramme
À quoi sert le TFA 0,1%
Acidifier la phase mobile (diminue son pH sous le pKa des molécules analysées = les analytes seront donc toutes sous la forme protonées, donc ajout de H donc pas de charges)
Ainsi, l’absence de charge = diminue attraction des analytes avec la phase la plus polaire (phase mobile)
Décrit le coefficient de partage en HPLC
Le coefficient de partage entre la phase mobile et stationnaire = ratio de temps passé dans chacune des phases
Il diffère d’une molécule à un autre en fct de leur polarité et leur attraction à chacune des phases
Pk le coefficient de partage diffère selon la molécule
Car différentes molécules ont différente strucutres, pKa et LogP.
Nomme en ordre quelle molécule a un temps de rétention le plus long entre ASA, SA et MBA
- ASA (plus court) et donc coefficient de partage le plus bas
- SA
- MBA (plus long)
Sur un chromatogramme, que veut dires les premiers pics observés?
pic d’injection/Tm (TEMPS MORT) = temps de transit des composés non retenus jusqu’à leur sortie et détection
Quelles sont les infos à chaque Tr (temps de rétention) sur un chromatogramme
Hauteur du pic
Largeur du pic
Aire du pic: IMP pour faire courbe standard. Aire proportionnelle à concentration.
Protocole 1.1: Dosage des ingédients actifs et impuretés dans un comprimé d’Aspirine par HPLC
Quel est le volume d’injection et la lecture UV est à quelle nm
1 ul
228 nm
Protocole 1.1: Dosage des ingédients actifs et impuretés dans un comprimé d’Aspirine par HPLC
Décrit le protocole en général
- Prendre comprimé d’Aspirine
- Écraser comprimé dans un mortier
3.Ajout 10ml d’éthanol 100% dans le mortier - transférer tube conique et répéter avec 5 ml d’éthanol 100%
- Ajouter H2O nano jusqu’à 50 ml (vortexer)
- Avec seringue à nylon, filtrer échantillon (surnageant)
- Prendre 100 ul et metttre vial HPLC pour SA dosage
- Diluer 1/100 dans ACN/0,1% TFA et prendre aussi 100 ul et le mettre dans un vial à HPLC pour dosage de ASA
- ANAlyser au HPLC
Protocole 1.2 Courbe standard de calibration de l’ASA et SA par HPLC
Quel est le domaine de concentration
Entre 3 ug/ml et 100 ug/ml
Protocole 1.2 Courbe standard de calibration de l’ASA et SA par HPLC
Décrit le protocole
- Préparer un standard dilué à partir de la solution mère standard (ASA + SA, 1mg/ml) POUR UN Vf de 1ml. APrès on complète avec le diluant d’ACN/0,1%TFA
- Transfrérer 100 ul dans un vial à HPLC
- ANalyse au HPLC
