Termes clés - Biologie moléculaire

Question 1

ADN (Acide Désoxyribonucléique)

Answer 1

Molécule formée de deux brins antiparallèles en double hélice, composée de nucléotides (A, T, G, C). C’est le support principal de l’information génétique.

Question 2

ADN plasmidique (plasmide)

Answer 2

Petite molécule d’ADN circulaire, distincte du chromosome bactérien, pouvant se répliquer de façon autonome. Souvent utilisée comme vecteur d’expression.

Question 3

ADNc (ADN complémentaire)

Answer 3

ADN synthétisé à partir d’ARNm via la transcriptase inverse. Il ne contient pas d’introns, car il dérive d’un ARN déjà épissé.

Question 4

Amorces (Primers)

Answer 4

Courtes séquences d’ADN complémentaires des extrémités 3’ de la région à amplifier. Elles amorcent la synthèse lors de la PCR.

Question 5

AmpR (Ampicilline résistance)

Answer 5

Gène de résistance à l’ampicilline, permettant la sélection des bactéries transformées en milieu contenant l’antibiotique.

Question 6

Appariement des bases

Answer 6

A s’apparie à T (2 ponts H) et G s’apparie à C (3 ponts H) dans l’ADN, assurant la complémentarité entre brins.

Question 7

Bactéries compétentes

Answer 7

Cellules modifiées (chimiquement ou par électroporation) pour être capables d’absorber de l’ADN étranger.

Question 8

Chromatographie d’affinité

Answer 8

Technique de purification exploitant une interaction spécifique (ex. : GST-glutathion) pour isoler la protéine cible.

Question 9

Clivage (avec une protéase)

Answer 9

Action de couper une protéine de fusion (ex.: GST + protéine d’intérêt) pour séparer l’étiquette de la protéine.

Question 10

Conjugaison

Answer 10

Transfert d’ADN (souvent plasmidique) d’une bactérie donneuse à une bactérie receveuse via un pilus sexuel.

Question 11

Criblage (gène de criblage)

Answer 11

Gène (ex. lacZ) permettant d’identifier si le plasmide est recombinant (colonies blanches vs bleues en présence de X-Gal).

Question 12

Dénaturation (PCR)

Answer 12

Étape de la PCR (94 °C) où les deux brins d’ADN se séparent (rupture des ponts H).

Question 13

dNTPs (désoxyribonucléotides triphosphates)

Answer 13

dATP, dTTP, dGTP, dCTP: monomères dont l’ADN polymérase a besoin pour synthétiser de nouveaux brins.

Question 14

Électrophorèse sur gel d’agarose

Answer 14

Méthode de séparation des fragments d’ADN selon leur taille sous champ électrique (migration vers la borne +).

Question 15

Enzymes de restriction

Answer 15

Endonucléases qui reconnaissent des séquences d’ADN spécifiques et les coupent (ex. EcoRI).

Question 16

Extrémités cohésives (sticky ends)

Answer 16

Coupures en escalier laissant des bases complémentaires libres, facilitant la ligation d’un fragment compatible.

Question 17

Extrémités franches (blunt ends)

Answer 17

Coupures droites, sans surplomb de bases. Moins propices à l’hybridation spontanée que les « sticky ends ».

Question 18

Gène d’intérêt (insert)

Answer 18

Segment d’ADN codant la protéine que l’on veut produire ou étudier. On l’insère dans un vecteur.

Question 19

Gène de sélection

Answer 19

Gène (AmpR, par ex.) conférant une résistance à un antibiotique, permettant de sélectionner les cellules transformées.

Question 20

Gène lacZ

Answer 20

Code la β-galactosidase. Souvent utilisé pour le criblage (colonies bleues si intact, blanches si interrompu).

Question 21

GST (Glutathion-S-Transférase)

Answer 21

Enzyme utilisée comme étiquette de fusion pour purifier la protéine (affinité pour le glutathion).

Question 22

Hybridation (PCR)

Answer 22

Étape de la PCR (env. 37-72 °C) où les amorces se fixent de façon complémentaire aux brins dénaturés.

Question 23

Liaison phosphodiester

Answer 23

Liaison covalente entre le groupement phosphate et le sucre (désoxyribose) de nucléotides adjacents.

Question 24

Ligation (ADN ligase)

Answer 24

Réaction de jonction de deux fragments d’ADN (extrémités cohésives ou franches) grâce à l’ADN ligase.

Question 25

PCR (Polymerase Chain Reaction)

Answer 25

Technique permettant d’amplifier exponentiellement un fragment d’ADN cible via cycles de dénaturation, hybridation, élongation.

Question 26

Promoteur

Answer 26

Séquence d’ADN où se fixe l’ARN polymérase pour débuter la transcription d’un gène (ex. promoteur lac).

Question 27

Protéine de fusion

Answer 27

Protéine recombinante constituée de la protéine d’intérêt + une étiquette (ex. GST) pour faciliter sa purification.

Question 28

Protéine recombinante

Answer 28

Protéine produite par un organisme ayant intégré de l’ADN étranger (ex. insuline humaine exprimée par E. coli).

Question 29

RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR)

Answer 29

Variation de la PCR démarrant d’un ARN, converti en ADNc par la transcriptase inverse, puis amplifié.

Question 30

Site de clonage multiple (SCM/MCS)

Answer 30

Région d’un plasmide comportant plusieurs sites de restriction distincts pour insérer un gène d’intérêt.

Question 31

Superenroulé (supercoiled)

Answer 31

Forme la plus compacte d’un plasmide (non coupé), migrante plus rapide en électrophorèse sur gel d’agarose.

Question 32

Taq polymérase

Answer 32

ADN polymérase thermostable, isolée de Thermus aquaticus, supportant les températures de dénaturation en PCR.

Question 33

Transformation (bactérienne)

Answer 33

Introduction d’un ADN étranger (plasmide ou autre) dans une bactérie, lui conférant un nouveau caractère.

Question 34

Transduction

Answer 34

Transfert d’ADN d’une bactérie à une autre par l’intermédiaire d’un bactériophage (virus).

Question 35

Transcriptase inverse

Answer 35

Enzyme rétrovirale convertissant l’ARN simple brin en ADNc (outil crucial en RT-PCR).