Técnica Histológica

Question 1

¿Qué es la histología?

Answer 1

La histología es la ciencia que estudia los tejidos del cuerpo a partir de la observación de los mismos.

Question 2

¿Qué es la resolución?

Answer 2

La resolución es la distancia máxima de observación en la que dos puntos aún se pueden distinguir como dos formas separadas.

Question 3

¿Cuál es la capacidad de resolución del ojo humano?

Answer 3

0,2 milímetros

Question 4

¿Qué es un microscopio y para que se usa en histología? ¿Qué tipos de microscopio existen?

Answer 4

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que sean demasiado pequeños como para poder ser observados a simple vista, cómo las células que componen a los tejidos y las estructuras de las mismas.
Los microscopios más comunes en Histología son el microscopio óptico, el MET y el MEB

Question 5

¿Qué es un microscopio óptico? ¿Que resolución tiene?

Answer 5

Un microscopio óptico es un microscopio mediante el cual se pueden observar preparados directamente mediante la visión, iluminando el preparado con una fuente de luz. Se pueden observar tejidos vivos o muertos. Su capacidad de resolución es de 0,2 micrómetros (μm)

Question 6

¿Cómo funciona un microscopio óptico?

Answer 6

El microscopio óptico cuenta con oculares para observar el tejido (puede ser monocular, binocular o trinocular), el cual se apoya en la platina. Entre los oculares y la platina se encuentra el revólver, que permite seleccionar distintas lentes ofreciendo distintos grados de resolución.
Debajo de la platina encontramos un condensador que condensa la luz que proviene de la fuente lumínica

Question 7

¿Qué es el aumento y cómo se calcula?

Answer 7

El aumento es la magnitud de tamaño en que se acrecienta la muestra que se coloca en la platina. Las lentes oculares suelen tener un aumento de 10X, el cuál se podrá acrecentar con la combinación de los diferentes objetivos que ofrece el revólver.
Se deberá multiplicar el aumento que ofrece el ocular por el aumento que ofrece el objetivo seleccionado para obtener el valor del aumento total.

Question 8

¿Cuál es la diferencia entre el microscopio óptico y los microscopios electrónicos?

Answer 8

Mientras el microscopio óptico utiliza una fuente lumínica para observar la muestra, los microscopio electrónicos utilizan un haz de electrones.

Question 9

¿Qué es un MET? ¿Que resolución tiene?

Answer 9

El microscopio electrónico de transmisión emite un haz de electrones que atraviesan la muestra y permiten ver la ultra estructura de la misma, como “a transparencia”. Su resolución es de 0,2 nanómetros.

Question 10

¿Qué es un MEB? ¿Que resolución tiene?

Answer 10

El microscopio electrónico de barrido emite un haz de electrones que impactan contra la superficie de la muestra y permiten observar a la misma en 3D, generando una imagen digital. Su resolución es de 3 a 5 nanómetros.

Question 11

¿Cuál de los microscopios tiene mayor poder de resolución?

Answer 11

El MET, con una resolución de 0,2 nanómetros.

Question 12

¿Qué es la técnica histológica?

Answer 12

La técnica histológica es el conjunto de pasos a seguir de manera ordenada para la obtención de preparados histológicos aptos para ser estudiados mediante el microscopio.

Question 13

¿Qué métodos existen en la técnica histológica?

Answer 13

Existen los medios:
* Inmediatos. (permite observar la muestra viva)
* Sin coloración
* Con coloración (intravital, vital)

• Mediatos (la muestra se observa muerta)

Question 14

¿Cuál es la técnica de tinción más utilizada de la técnica histológica?

Answer 14

El uso de los colorantes hematoxilina-eosina

Question 15

¿Cómo está compuesta la capa más externa de la piel, y con qué se suele teñir?

Answer 15

Está compuesta por queratina y se suele teñir con eosina

Question 16

¿Cuáles son los pasos de la técnica histológica? Describir cada uno

Answer 16

1. Obtención de la muestra
2. Fijación
3. Inclusión en parafina
4. Corte y montaje inicial
5. Coloración
6. Montaje final

Question 17

¿Cómo se puede realizar la fijación de la muestra?, ¿cuáles son las sustancias más comunes utilizadas?

Answer 17

La muestra se puede fijar por métodos físicos (desecación por calor, o congelamiento por frío) o químicos (formalina, formol 10%, líquido de Zenker).
El método más común es el de la formalina (formaldehído 37%) ya que conserva la estructura de la célula y los componentes extracelulares.

Question 18

Describir el método de inclusión en parafina.

Answer 18

En primer lugar se debe deshidratar la muestra (sacar el agua), sumiéndola en alcohol a concentraciones crecientes. Luego de este proceso la muestra estará impregnada en alcohol, que tampoco funciona bien con la parafina, por lo que se debe llevar a cabo la aclaración, reemplazando el alcohol por otro compuesto que sea soluble tanto en alcohol como en parafina (Ej: Xilol).
Una vez cumplidos estos procesos se puede iniciar la inclusión. El objetivo de la misma es otorgar consistencia a la muestra a fin de someterla al corte. Este proceso consiste en integrar a la muestra en un cubo de parafina sólida para lograr una consistencia mayor.

Question 19

Describir el corte y montaje inicial

Answer 19

Para realizar el corte en hebras de la muestra se utiliza un micrótomo. La hebra permanecerá envuelta en la parafina. La tinción se realiza con colorantes afines al agua, mientras que la parafina es hidrofóbica. Debido a esto, antes del siguiente paso se deberá revertir el proceso efectuado en el paso 3, regresando a la hidratación de la muestra. Para esto, se desparafinará la muestra mediante el método de aclaración, luego se la rehidratará, en una concentración creciente de agua (y decreciente en alcohol). Una vez sumergida en agua, se “pesca” la muestra con el portaobjetos bañado en gelatina de Mayer, que permitirá la adhesión de la muestra.

Question 20

Describir la técnica de coloración

Answer 20

Antes de comenzar con la coloración, se deberá desparafinar y rehidratar la muestra. Luego, se aplicará un colorante a la muestra, dependiendo de que se quiera visualizar. Para estructuras ácidas se utilizan colorantes básicos, y para estructuras básicas se utilizan colorantes ácidos

Question 21

¿Cuáles son algunos colorantes ácidos, y qué color tiñen?

Answer 21

• Fucsina ácida (rojo)
• Azul de anilina (azul),
• Eosina (rojo)
• Naranja G (naranja)

Question 22

¿Cuáles son algunos colorantes básicos, y qué color tiñen?

Answer 22

• Hematoxilina (tiñe núcleos celulares de azul-violáceo)
• Verde de metilo (verde)
• Pironina G (rojo)
• Azul de toluidina (Azul)
• Fucsina básica
• Azúl metileno
• Tionina
• Azúl alcian
• Orceína (tiñe fibras elásticas de marrón).

Question 23

¿Cómo se denominan los tejidos que se tiñen con colorantes ácidos?

Answer 23

Acidófilos

Question 24

¿Cómo se denominan los tejidos que se tiñen con colorantes básicos?

Answer 24

Basófilos

Question 25

¿Cuales son otras técnicas de coloración, además de los colorantes?

Answer 25

Impregnaciones metálicas para observar células adiposas.
Metales pesados, como permanganato y osmio, para observar las estructuras de la membrana.
Técnica de P.A.S (ácido peryódico de schiff) para observar glucógeno, hidrato de carbono, glucoproteínas y membranas basales.

Question 26

¿Qué son los conceptos de metacromasia y ortocromasia?

Answer 26

Hacen referencia a la reacción en la coloración. Si el tejido obtiene el color propio del colorante, el tejido es ortocromático, mientras que si el color vira, el tejido es metacromático.

Question 27

Describir el montaje final

Answer 27

Luego de colorear, la muestra, comienza el montaje final. El cubreobjeto va a estar impregnado con un tipo de bálsamo oleoso, mientras que la muestra va a estar cubierta en colorantes hidrófilos; es decir, no están en concordancia. Por esto, se deberá someter a la muestra nuevamente al proceso de deshidratación y luego aclaración, para que quede en un estado compatible con el bálsamo.

Question 28

¿Qué es la técnica de Mallory?

Answer 28

Es una técnica de tinción que utiliza tres colorantes ácidos: anilina azul (para teñir colágeno), fucsina ácida (para teñir el citoplasma y los núcleos) y naranja G (para teñir los eritrocitos).