Techniques analytiques Flashcards
Définition électrophorèse ?
Méthode de séparation des constituants d’un mélange basée sur différentes vitesses procurées par la charge elec/taille/forme dans un champs électrique.
Formule liée à la charge électrophorétique U ?
v = U.E
U = Q/(6pi . n . r)
Que contient la phase liquide pr électrophorèse ?
des électrolytes qui permettent de diriger et soutenir le champs élec.
Différents gels pr électrophorèse ?
agarose, acétate de cellulose, polyacrylamide
Qu’est ce que le flux électro-osmotique ?
C’est un courant d’électroendosmose, qd toute la phase liquide elle-même est mise en mouvement.
Quelles sont les méthodes de révélation/detection en electrophorèse ?
photomoètre (pdnt migration)
BET, MidoriGreen, Bleu Coomassie, Argent (migration ended)
Comment sont présentés les résultats en electrophorèse ?
Electrophorégramme :
Absorbance en fonction d migration
Surface = K*[molec]
Quels sont les 3 types d’électrophorèse ?
Electrophorèse de zone : séparation fct° charge/PM
Isoélectrofocalisation : gradient de pH
Isotachophorèse : gradient de champs électrique (s’arrête au nv des electrolytes)
Formation gel d’acrylamide
Acrylamide = monomère
Le Bisacrylamide = agent pontant
=> mailles
Calcul du taux d’un gel polyacrylamide
T = (macryl*mbisacryl)/Vgel
2 types de gel dans un SDS ?
Gel d’empilement/concentration/stacking
Gel de séparation/migration/solving
Principe d’une électrophorèse Bidimensionnelle ?
Ex : IEF suivi d’un SDS-PAGE (double migration successives)
Définition d’un chromatographie ?
Méthode de séparation basée sur la différence de vitesse des constituants procurée par l’interaction de chaque molec avec une phase mobile et une stationnaire
Que contrôle le module d’injection ?
l’étanchéité
le volume d’échantillon
(l’état liquide/gazeux de l’échantillon)
Qu’appelle-t-on l’élution ?
avant : le mouvement de la phase mobile
aujd : on ajt celui des molécules
Comment sont rendus les résultats d’une chromato ?
Chromatogramme : signal mesurée par détecteur en fonction temps écoulé depuis injection
S = K*Q
HPLC ?
High Pressure Liquid Chromatography
Quels sont les modes d’élution ?
constitution phase mobile : Isocratique / gradient de [C]
pression phase mobile : isobare / gradient de pression
T° des 2 phases : isotherme / gradient de T°
La silice (ex de phase stationnaire) est apolaire, comment la rendre apolaire ?
Fixation d’autres molec
Classer les 8 exemples de phases mobiles vues en cours , de la plus polaire à la plus apolaire
eau
acétonitrile
méthanol
isopropanol
dichlorométhane
hexane
phosphate de potassium
heptanesulfate de sodium
Définir phase normal et phase inverse ?
phase normal : polarité phase fixe > phase mobile
phase inverse : polarité phase fixe < mobile
Intérêt phase normales et inverses ?
normale : séparer des molec plutôt polaires
inverse : séparer molec plutôt apolaires
Quels sont les rôles de la pompe ?
conférer débit, appliquer une pression, retirer les gaz dissouts grâce à un dégazeur, (mélanger plusieurs solvants)
caractéristiques HPLC de l’IUT
débit : mL/min
pression : 400 bar
volume injecté : 20µL
Spectrophotomètre UV : lampe au deutérium
Caractéristiques GC IUT
Flame ionization detector : FID, le signal est une différence de potentiel
split/splitless
gaz vecteur : N2 ( H2, He ou Ar possibles = gaz stables et inertes à haute T°)
