T15 - DNA recombinante

Question 1

Etapas da técnica de DNA recombinante

Answer 1

1. Síntese de DNA complementar
2. Inserção das enzimas de restrição
3. LigaçãO do cDNA (transporta o gene de interesse) ao vetor
4. Formação do plasmídeo recombinante
5. Transformação bacteriana
   6.Crescimento emultiplicação das bactérias
6. Purificação das proteínas

Question 2

Tipos de transformação bacteriana

Answer 2

Método Químico: Adição de CaCl2 (cloreto de cálcio)
Eletroporação

Question 3

Qual a bactéria mais usada no DNA recombinante

Answer 3

E. Coli - bactéria gram negativa

Question 4

Características que um plasmídeo tem de ter para se usar no DNA recombinante

Answer 4

Origem de replicação
Marcador seletivo (Ex: ressitência a um antibiótico)
Polylinker (local rico em sequências de restrição)

Question 5

Como se produz cDNA?

Answer 5

Síntese a partir de mRNA com recurso a primers e Transcriptase reversa

Question 6

Enzimas de restrição são … que reconhecem sequências de …

Answer 6

Endonucleases / 4-8 nucleotídeos

Question 6

Na técnica de DNA recombinante usam se enzima de restrição que provoquem extremidades…

Answer 6

Coesivas

Question 7

Qual o equivalente de transformação bacteriana em células eucarióticas?

Answer 7

Transfeção