Séance 3 Flashcards
Que faut-il faire normalement avec la production d’anticorps que nous n’avons pas fait?
Un test de dépistage de la production d’anticorps
Le test de capture d’anticorps n’est ni plus ni moins qu’un… ?
ELISA (pas la belle fille)
Quelles sont les 5 étapes de l’ELISA?
1- adsorption sur la plaque (polystyrène) des antigènes
2- Blocage des sites résiduels
3- Échantillons de sérum
4- Anticorps secondaires
5- Révélation
Qu’est ce que le blocage des sites résiduels?
Ajout d’une autre protéine pour enlever le ‘bruit de fond’ pour s’assurer que les anticorps se lient aux Ag et non à la plaque
Qu’est ce que l’étape d’échantillon de sérum?
On ajoute le sérum dans les puits pour que les Ac se lient aux Ag. Ac non liés sont éliminés par lavage
Que sont les anticorps secondaires?
Des anticorps anti-immunoglobulines de souris conjugués à la peroxydase de raifort, une enzyme. Ils vont se lier aux Ac du sérum. Ac secondaires non liés enlevés par lavage
Comment se déroule l’étape de révélation?
Un chromogène (OPD) dihydrochloride o‑phénylènediamine est ajouté avec du H2O2 dans les puits. L’H2O2 interagit avec la peroxydase de raifort pour oxyder l’OPD qui donne la couleur jaune.
Comment on arrête la révélation?
Ajout d’acide sulfurique H2SO4 dans les puits puis lecture à 492 nm.
Dans quel tampon avons-nous mis l’OPD?
Tampon de citrate de sodium et d’acide citrique
Quel est le blanc dans la plaque ELISA?
Un puit sans anticorps primaire, donc le bruit de fond
Sur une courbe de titre d’anticorps, comment détermine-t-on le titre?
Le dernier point sur la courbe de titrage avant de traverser le seuil de l’antisérum négatif
Quelle était la base du logarithme du titrage?
base 2
