Séance 1 Flashcards
Pourquoi choisir la souris dans un laboratoire?
Peu coûteux, facile d’hébergement, facile à manipuler.
Quels sont les dangers de manipuler des souris?
Risques de faire des réactions allergènes par leur salive/poil, rhino-conjonctivite, urticaire et asthme
Le choix de l’animal est dicté par ces quelques facteurs :
a. Le volume d’antisérum requis (lapin, chevaux, moutons, chèvres, bovins, poulets, souris, rats, hamsters);
b. La relation phylogénétique entre l’espèce choisie et la protéine qui sert d’immunogène;
c. La fonction effectrice des anticorps produits (capacité à lier le complément, etc.);
d. L’utilisation prévue des anticorps produits (besoin d’un anticorps secondaire spécifique à une espèce).
Pourquoi on favorise les lignées inbred?
pour avoir une population homogène et avoir des résultats communs similaires
Quelle est la quantité injectée chez la souris?
Entre 0,5 et 100 ug
Quelle sont les deux voies d’injection pour l’immunisation de la souris?
Intra-péritonéale et ensuite intraveineuse pour la dose de rappel
Est ce que les anticorps obtenus sont monoclonaux ou polyclonaux?
Polyclonaux
Quel adjuvant a été utilisé dans l’immunisation primaire des souris?
Quil-A, vient d’un arbre, efficace avec les protéines membranaires
Quelles protéines sont utilisées pour l’immunisation?
A et O
Où sont retrouvées les différentes classes des cellules immunitaires?
Les organes lymphoïdes secondaires
Qu’est ce que le ACK (ammonium-chloride-potassium) et à quoi sert-il?
C’est un red lysis buffer qui attaque les érythrocytes sans affecter les globules blancs
Où doit on utiliser le red lysis buffer?
La rate, le sang et la moelle osseuse
Que permet l’ajout de PBS et serum?
Aux cellules de mieux survivre
Comment peut-on différencier les lymphocytes de la rate?
Grâce aux glycoprotéines portées à leur surface
Comment les différents lymphocytes seront différenciés lors de la cytométrie en flux?
Avec des anticorps avec fluorochromes spécifiques aux glycoprotéines
Que veulent dire les paramètre FSC et SSC en cytométrie?
FSC : taille
SSC : Granularité
Qu’est ce que le bruit de fond?
Les cellules auto-fluorochromes, qui n’ont pas reçu de fluorochromes. Permet de mieux isoler les cellules avec fluorochromes en enlevant ce bruit de fond
Que sont les fluorochromes utilisés?
FITC (520nm) et PE (576nm) (excités par laser argon 488nm)
Qu’est ce que du déversement de fluorescence?
Quand un filtre capte des photons provenant d’un autre fluorochrome que celui assigné
Qu’est ce qu’un contrôle de compensation?
Quand on effectue des spectres individuels pour chaque fluorochrome afin de mieux mesurer le déversement de fluorescence
Est ce que je dois toujours faire des contrôles de compensation?
Oui, sinon l’analyse est impossible car on ne peut pas situer le déversement de fluorescence
Comment de cellules sont nécessaires pour avoir un bon résultat lors de l’analyse?
10^4
Que doit être la concentration d’un échantillon pour donner de bon résultats?
2x10^5 à 2x10^7 cellules/ml
Avec quel instrument faisons-nous le comptage cellulaire?
Hématimètre
Quelles cellules doit on compter dans les carrés?
Celles qui sont non colorées et qui touchent les parois gauches et supérieures uniquement, compter les 4 carrés et faire la moyenne
Avec quoi sont colorées les cellules mortes lors du comptage
Bleu de trypan
Avec quoi sont anesthésiées les souris?
Kétamine et xylazine
Que font les ganglions dans le PBS1%SVF?
Ils coulent et les graisses flottent
Quelle est la formule pour le comptage cellulaire?
Moyenne/carré x dilution dans bleu de trypan x 10 000
Si j’ai 2,5 millions cellules/ml que dois-je faire pour être en mesure de faire de la cytométrie?
Prendre 4 ml, centrifuger, enlever 3 ml pour obtenir 10 000 000 cellules/ml
Pourquoi on ne mettait pas le même cocktail dans les tubes?
Parce que ce ne sont pas les mêmes anticorps avec les mêmes fluorochromes. On ne veut pas toujours marquer le même type cellulaire
Pourquoi les tubes 1 4 et 6 n’avaient pas d’anticorps?
Parce qu’il sont utiles pour faire les contrôles de compensation
