SDS page

Question 1

Hvad bruges SDS page til?

Answer 1

metode, der adskiller proteiner efter molekylvægt (masse) i et elektrisk felt

Question 2

Hvilken enhed opgøres massen af proteinerne i?

Answer 2

kDa (kilodalton): Størrelsen af proteiner opgøres gerne i kDa (kilodalton), som svarer til massen i kilogram af et mol af proteinet.

Question 3

Hvad betyder Acrylamidkoncentrationen i gelen?

Answer 3

Acrylamidkoncentrationen i gelen har indflydelse på porestørrelsen. Jo højere acrylamidkoncentrationen er, jo mindre vil porestørrelsen i gelen være.

Question 4

Hvad betyder den neutrale pH i gelen?

Answer 4

Gelens neutrale pH-værdi yder stabilitet, sensitivitet og reducerer nedbrydningen af proteiner

Question 5

Hvad bruges glycerol til?

Answer 5

Glycerol bruges til at øge densiteten af prøven, således prøverne kan tynges ned i brøndene. Glycerol tilsættes for at øge densiteten af de loadede prøver, så de forbliver i bunden af brønden og ikke blandes med running bufferen.

Question 6

Urea? og hvordan

Answer 6

Urea forstyrrer den sekundære struktur i proteiner, og bevarer dem på deres monomeriske form. Urea bryder hydrogenbindinger og hydrofobe kræfter i proteinerne, således de holdes mere opløselige.

Question 7

DTT

Answer 7

DTT fungerer som reducerende agent, der bryder disulfidbindinger og dermed forstyrrer den tertiære struktur

Question 8

Bromophenol Blue

Answer 8

Bromfenol blå er løbemarkøren for elektroforesen. They include a dye such as Bromophenol Blue to help visualize migration.

Question 9

Hvad sker der efter elektroforese?

Answer 9

Gelens proteinbånd skal farves og fikseres gennem en farvning- og affarvningsproces.
Under farvningsprocessen dækkes gelen af en eddikesyre-ethanol-ddH2O- blanding tilsat CBB (Coomassie Brilliant Blue), hvor eddikesyre og ethanol fungerer som fikseringsmidler.

Question 10

Eddikesyre, ethanol og ddH2O har bl.a. til formål at:

Answer 10

Eddikesyre, ethanol og ddH2O har bl.a. til formål at fjerne SDS, da dens negative ladning mistænkes for at konkurrere med CBB om interaktion med proteinet under farvningsprocessen.

Question 11

Fikseringsmidlerne forhindrer:

Answer 11

Fikseringsmidlerne forhindrer, at proteinbåndene diffunderer og dermed danner mindre tydelige bånd i gelen.

Question 12

I eddikesyre vil mange proteiner:

Answer 12

I eddikesyre vil mange proteiner ligge under deres isoelektriske punkt, hvilket resulterer i positivt ladede proteiner og en stærkere interaktion mellem protein og farvestof

Question 13

hvordan vil størrelsen af båndene ligge i gelen+

Answer 13

SDS-behandlede proteiner med forskellig størrelse i en prøve kan således adskilles, og de største proteiner vil lægge sig som bånd øverst i gelen og de mindste nederst

Question 14

Running bufferen faciliterer :

Answer 14

Running bufferen, hvis ioner faciliterer ledning af strøm gennem elektroforesesysteme